Tes urine dan air liur untuk tuberkulosis

Berbagai tes yang berbeda untuk tuberkulosis dijelaskan bukan oleh kemudahan diagnosis penyakit ini, tetapi karena kelicikannya. Sejak zaman kuno, orang telah mencoba menemukan cara untuk mengidentifikasi phthisis pada tahap awal dan karena itu melakukan berbagai penelitian terhadap pasien, beberapa di antaranya benar-benar terbiasa sebagai metode mendiagnosis penyakit atau sebagai cara untuk mengamati proses penyakit.

Untuk apa tes urine dan air liur?

Tes tangki untuk tuberkulosis saliva dan urin dilakukan untuk mendeteksi keberadaan patogen di dalam tubuh. Pada saat yang sama, tujuan dari penelitian ini lebih mungkin untuk mengkonfirmasi penyakit dengan gejala yang ada, dan tidak menemukannya, karena ada banyak metode lain yang lebih dapat diandalkan untuk diagnosis pencegahan awal.

Selain itu, dokter dapat melakukan tes urine atau sputum, serta analisis air liur untuk tuberkulosis untuk mengidentifikasi proses transisi dari bentuk tertutup penyakit ke terbuka, yang ditandai dengan pelepasan sejumlah besar bacilli dengan cairan alami dan kotoran pasien, dan karena itu menjadi sangat epidemiologis berbahaya bagi orang lain.

Tes urine

Jawaban atas pertanyaan bagaimana cara lulus tes urin untuk tuberkulosis cukup sederhana. Urin untuk tuberkulosis dikumpulkan seperti analisis umum cairan ini, akrab bagi semua orang sejak kecil:

  1. Diperlukan pagi hari untuk mengambil bagian pertama urin, sementara hanya mengumpulkan bagian tengah, dan bukan yang pertama atau terakhir.
  2. Sebelum mengumpulkan, perlu untuk benar-benar mencuci wadah dan organ kemih itu sendiri, sehingga tidak ada yang bisa masuk ke dalam jar: protein, darah, kuman, dll.
  3. Jumlah cairan yang diperlukan untuk penelitian hanya 50-100 ml, jadi Anda tidak boleh membawa kaleng air yang setengah liter.

OAM dapat diambil di klinik manapun, namun basil tuberkulosis hanya dapat ditemukan di laboratorium khusus yang tidak tersedia di setiap wilayah di Rusia. Hasil normal dari survei ini adalah sebagai berikut:

  1. Warna: kuning, kuning muda atau jerami.
  2. Transparansi: tinggi.
  3. Bau: unsharp.
  4. Reaksi PH: 4–7.
  5. Densitas: 1012–1022 g / l.
  6. Protein: tidak, tetapi kadang-kadang hingga 0,033 g / l dapat diterima.
  7. Glukosa: hingga 0,8 mmol / l.
  8. Badan keton: tidak.
  9. Bilirubin: tidak.
  10. Urobilinogen: 5–10 mg / l.
  11. Hemoglobin: tidak.
  12. Erythrocytes: pada wanita, nilai maksimum yang diijinkan adalah hingga tiga, dan pada pria, hingga 1 terlihat.
  13. Leukosit: jumlah tubuh yang diizinkan dalam bidang pandang hingga 6 pada wanita dan hingga tiga pada pria.
  14. Sel epitel: hingga 10 pcs. terlihat.
  15. Silinder: tidak ada atau satu-satunya hialin yang hadir.
  16. Garam: tidak.
  17. Bakteri: tidak.
  18. Jamur: tidak.
  19. Parasit: tidak, tetapi jika ada, maka tidak menakutkan: hanya dalam kasus ini, terapi dengan obat-obatan anthelmintik dilakukan.

Tingkat OAM untuk tuberkulosis biasanya tetap sama. Satu-satunya pengecualian adalah bentuk akut dari penyakit, ketika urin berubah karena gangguan organ internal, serta lesi kronis paru-paru atau tulang, ketika mungkin ada tanda-tanda amiloidosis dalam analisis - pelanggaran metabolisme protein, di mana hasil pemeriksaan akan mengandung protein.

Pengecualian adalah tuberkulosis ginjal atau saluran kemih - bentuk ekstrapulmoner yang paling umum dari penyakit, yang disebabkan oleh transfer infeksi dari aliran darah, di mana urinalisis ke tuberkulosis sangat bervariasi. Dalam hal ini, fenomena berikut ini diamati:

  • reaksi persisten asam tajam;
  • leukocyturia - leukosit dalam urin;
  • proteinuria - protein dalam urin;
  • erythrocyturia - darah dalam urin;
  • pyuria - nanah dalam urin.

Juga, dalam bentuk akut penyakit atau selama tuberkulosis ginjal dan saluran kemih di urin, ada bentuk aktif dari basil patogen, yang ditentukan oleh metode pewarnaan menurut Zil-Nelson.

Tes air liur

Bahkan, BAC tidak menghasilkan analisis saliva untuk tuberkulosis. Analisis saliva sering tidak diketahui orang-orang menyebut studi dahak untuk tuberkulosis. Alih-alih tes dahak, analisis air liur untuk tuberkulosis dapat dilakukan hanya dalam kasus anak-anak yang baru lahir sangat kecil yang tidak mampu meludah ekspektoran karena secara otomatis menelan segera setelah ekspektasi. Namun, dalam kasus ini, para dokter hanya mengambil biopsi jaringan atau menarik sekresi paru-paru dengan probe, dan jangan berkerumun dengan air liur.

Analisis dahak patogen juga dilakukan menggunakan metode Ziehl-Nelson. Selain basil, beberapa tanda patologi paru dapat dipertimbangkan dengan mata telanjang: gips berserat, nanah, darah, potongan jaringan dan apa yang disebut lentil - inklusi besar dengan kepala peniti atau bentuk bulat yang lebih kecil, di dalamnya biasanya ada sejumlah besar basil.

Metode pewarnaan Ziehl-Nelson

Metode pewarnaan Ziel-Nelson didasarkan pada ketahanan asam Mycobacterium tuberculosis, yang dapat diwarnai hanya dengan perlakuan panas. Selama studi ini, jaringan tubuh, dahak, urin, darah, atau zat lain yang analisisnya untuk keberadaan MBT perlu dilakukan, tinggal di lingkungan yang baik untuk menanam basil untuk reproduksi, jika ada, tentu saja, dan kemudian dipanaskan dan diwarnai. Setelah itu, semuanya disimpan dalam asam hingga berubah warna dan dicat lagi tanpa pemanasan ke warna lain. Akibatnya, kantor cukup mudah dideteksi, karena mereka tetap warna dari warna pertama dan menonjol dengan baik terhadap latar belakang umum.

Phthisiology Notebook - Tuberkulosis

Segala sesuatu yang Anda ingin tahu tentang tuberkulosis

Tes darah dan urin untuk tuberkulosis

V.A. Koshechkin, Z.A. Ivanova

Unsur-unsur darah merah, sebagai suatu peraturan, berubah sedikit dengan tuberkulosis. Hanya setelah kehilangan akut darah dari paru-paru atau usus, anemia dapat diamati. Penurunan sedikit hemoglobin dapat dilihat pada tuberkulosis paru fibro-kavernosa kronis.

Salah satu indikator dari aktivitas proses tuberkulosis adalah ESR (laju endap darah). ESR yang dipercepat tidak hanya berkorelasi dengan aktivitas dan luasnya proses segar saat ini, tetapi juga dengan eksaserbasi proses kronis, terutama fibro-gua.

Unsur-unsur fraksi leukosit darah bereaksi terhadap proses tuberkulosis lebih aktif.
Secara konvensional, ada tiga fase perubahan dalam fraksi leukosit darah yang terkait dengan sifat lesi pada tuberkulosis paru.
1. Fase neutrofil dari perjuangan. Di dalam darah, proporsi neutrofil meningkat, akibatnya ada pergeseran rumus ke kiri. Eosinofil tidak ada, jumlah limfosit dan monosit berkurang.
2. Fase monosit - mengatasi infeksi. Dalam darah, jumlah limfosit meningkat, rumus darah bergeser ke kiri, jumlah neutrofil berkurang, eosinofil tunggal terdeteksi.
3. Fase pemulihan. Proporsi limfosit dan eosinofil meningkat. Jumlah darah secara bertahap normalisasi.
Pemisahan ke dalam fase ini hanya mencerminkan reaksi darah secara keseluruhan.

Pergeseran neutrofil nuklear pada tuberkulosis
Selain kuantitatif, kelompok neutrofil memiliki karakteristik kualitatif, yang jauh lebih tipis dan lebih awal menunjukkan berbagai proses patologis.

Tuberkulosis dewasa biasanya merupakan proses sekunder, paling sering hanya menyebabkan peningkatan neutrofil stab di dalam darah. Dengan bentuk infiltratif-pneumonia dan fenomena disintegrasi jaringan paru, pergeseran neutrofil ke kiri terungkap cukup jelas dan dapat mencapai hingga 20-30% inti pita.

Infiltrasi paru tidak hancur, dan bentuk fokus tuberkulosis pada periode pendeteksian pertama atau eksaserbasi pada suhu sub-demam dan gangguan fungsional tingkat rendah memberikan pergeseran yang kurang jelas. Namun, unsur-unsur hemogram yang tersisa mungkin tidak mendeteksi kelainan sama sekali. Oleh karena itu, definisi menyeluruh dari pergeseran nuklir menjadi sangat penting dalam tuberkulosis.

Doktrin pergeseran nuklir neutrofil diajukan oleh Arnet (1905) berdasarkan studi darah dalam berbagai infeksi, termasuk tuberkulosis.

Membuat perhitungan yang rumit dengan banyak sketsa, Arneth memperhatikan beberapa keteraturan dalam konfigurasi inti neutrofil.

Darah orang yang sehat mengandung:

  • 5% neutrofil dengan spanduk murni, nukleus non-tersegmentasi (kelas I);
  • 35% neutrofil dengan dua segmen dihubungkan oleh penyempitan mirip benang (kelas II);
  • 41% neutrofil dengan tiga segmen (kelas III);
  • 17% neutrofil dengan empat segmen (kelas IV);
  • 2% neutrofil dengan lima segmen (kelas V).

Selain segmentasi nukleus, Arnet memperhitungkan bentuknya. Jadi, untuk kelas pertama, ia memilih beberapa subclass sesuai dengan tingkat depresi dari inti yang tidak tersegmentasi. Kelas-kelas yang tersisa dibagi menjadi subclass tergantung pada bentuk segmen.

Pada infeksi yang proporsional dengan tingkat keparahannya, jumlah bentuk multi-segmen menurun, jumlah segmen segmen tiga segmen (segmen 2-3 yang rendah) dan non-tersegmentasi (menjadi sel yang relatif muda) meningkat.

Dalam skema Arneth, jumlah neutrofil kelas I yang tidak teridentifikasi ditampilkan di sebelah kiri; di sebelah kanan, jumlah sel kelas II berada, kemudian kelas III, dan seterusnya. Akibatnya, dengan peningkatan bentuk-bentuk non-segmentasi dan segmen rendah, jumlah sel di sisi kiri sirkuit meningkat dan ada "shift kiri".

Analisis urin
Ekskresi urin pada pasien tuberkulosis hampir normal. Perubahan patologis dalam urin dapat terjadi pada kekalahan tuberkulosis ginjal atau saluran kemih.
Pada pasien dengan tuberkulosis paru kronis, tanda-tanda amiloidosis dapat dideteksi.

3.7 Analisis darah dan urin.

Unsur-unsur darah merah, sebagai suatu peraturan, berubah sedikit dengan tuberkulosis. Hanya setelah kehilangan akut darah dari paru-paru atau usus, anemia dapat diamati. Penurunan sedikit hemoglobin dapat dilihat pada tuberkulosis paru fibro-kavernosa kronis. Salah satu indikator aktivitas TB adalah ESR (tingkat sedimentasi eritrosit). ESR yang dipercepat tidak hanya berkorelasi dengan aktivitas dan luasnya proses segar saat ini, tetapi juga dengan eksaserbasi kronis, terutama proses fibro-gua. Unsur-unsur fraksi leukosit darah bereaksi terhadap proses tuberkulosis lebih aktif.

Secara konvensional, ada tiga fase perubahan dalam fraksi leukosit darah yang terkait dengan sifat lesi pada tuberkulosis paru:

  1. Neutrofil - fase perjuangan. Di dalam darah, proporsi neutrofil meningkat, akibatnya ada pergeseran dalam formula darah ke kiri. Eosinofil tidak ada, jumlah limfosit dan monosit berkurang. Limfopenia adalah karakteristik bentuk progresif tuberkulosis.
  2. Fase monosit - mengatasi infeksi. Dalam darah, jumlah limfosit meningkat, rumus darah bergeser ke kiri, jumlah neutrofil berkurang, eosinofil tunggal terdeteksi.
  3. Fase pemulihan Proporsi limfosit dan eosinofil meningkat. Jumlah darah secara bertahap normalisasi.

Pembagian semacam itu ke dalam fase hanya mencerminkan reaksi darah umum, yang tidak mencerminkan seluruh kompleksitas reaksi darah terhadap infeksi tuberkulosis kronis.

Pergeseran neutrofil nuklear pada tuberkulosis.
Selain kuantitatif, kelompok neutrofil memiliki karakteristik kualitatif, yang jauh lebih tipis dan lebih awal menunjukkan berbagai proses patologis. Tuberkulosis dewasa, biasanya proses pasca-primer, paling sering hanya menyebabkan peningkatan neutrofil stab di dalam darah. Dengan bentuk infiltratif-pneumatik diucapkan dan dengan fenomena disintegrasi jaringan paru-paru, pergeseran neutrofil ke kiri terungkap cukup jelas dan dapat mencapai hingga 20-30% dari tusukan.

Infiltrat pulmonal tanpa disintegrasi dan bentuk fokus tuberkulosis pada periode deteksi atau eksaserbasi pertama pada suhu sub-demam dan gangguan fungsional tingkat rendah memberikan pergeseran yang kurang jelas. Pada saat yang sama, elemen hemogram yang tersisa mungkin benar-benar tanpa kelainan. Oleh karena itu, definisi menyeluruh dari pergeseran nuklir mendapat nilai diagnostik di tuberkulosis.
Studi tentang pergeseran nuklir neutrofilik diajukan oleh Arneth (Arneth) berdasarkan studi darah dalam berbagai infeksi dan terutama di tuberkulosis. Membuat perhitungan yang rumit dengan banyak sketsa, Arneth memperhatikan beberapa keteraturan dalam konfigurasi inti neutrofil. Dalam darah orang yang sehat, neutrofil dengan spanduk murni, nonsegmented nucleus (kelas I) adalah 5%; neutrofil dengan dua segmen dihubungkan oleh penyempitan filiform (kelas II) - 35%, kelas III - 41%, kelas IV - 17% dan kelas V - 2%. Pada infeksi yang proporsional dengan tingkat keparahannya, jumlah banyak bentuk tersegmentasi menurun, jumlah yang sedikit tersegmentasi (2-3 segmen) dan tumbuh tidak beregenerasi. Dalam skema Arneth, jumlah neutrofil unsegmented ditulis di sebelah kiri; di sebelah kanan adalah jumlah sel kelas II, kemudian kelas III, dan seterusnya. Akibatnya, dengan peningkatan bentuk-bentuk non-segmentasi dan kurang tersegmentasi, jumlah sel di sisi kiri sirkuit meningkat dan "pergeseran kiri" terjadi.

Tanda-tanda proses tuberkulosis, selain perubahan hemogram, adalah hiponatremia. Ini adalah pergeseran metabolisme yang paling khas. Penyebab hiponatremia adalah perkembangan zat hormon antidiuretik yang dipengaruhi oleh tuberkulosis paru. Terutama intensif zat ini diproduksi dalam periode bentuk-bentuk kasus-destruktif umum.

Analisis urin
Ekskresi urin pada pasien tuberkulosis hampir normal. Perubahan patologis dalam urin dapat terjadi pada kekalahan tuberkulosis ginjal atau saluran kemih. Protein, leukosit, MBT terdeteksi dalam urin. Pada pasien dengan tuberkulosis paru-paru kronis atau tulang, tanda-tanda amiloidosis dapat dideteksi (pururia resisten, gross hematuria).

Diagnosis tuberkulosis dalam analisis darah dan urin

Unsur-unsur darah merah, sebagai suatu peraturan, berubah sedikit dengan tuberkulosis. Hanya setelah kehilangan akut darah dari paru-paru atau usus, anemia dapat diamati. Penurunan sedikit hemoglobin dapat dilihat pada bentuk kronis tuberkulosis paru fibroa kavernosa.

Salah satu indikator dari aktivitas proses tuberkulosis adalah ESR (laju endap darah). ESR yang dipercepat tidak hanya berkorelasi dengan aktivitas dan luasnya proses segar saat ini, tetapi juga dengan eksaserbasi kronis, terutama proses fibrocavernous.

Unsur-unsur fraksi leukosit darah bereaksi terhadap proses tuberkulosis lebih aktif.

Secara konvensional, ada tiga fase perubahan dalam fraksi leukosit darah yang terkait dengan sifat lesi pada tuberkulosis paru.

  1. Tahap perjuangan Neutrofil. Di dalam darah, proporsi neutrofil meningkat, akibatnya ada pergeseran rumus ke kiri. Eosinofil tidak ada, jumlah limfosit dan monosit berkurang.
  2. Fase monosit - mengatasi infeksi. Dalam darah, jumlah limfosit meningkat, rumus darah bergeser ke kiri, jumlah neutrofil berkurang, eosinofil tunggal terdeteksi.
  3. Fase pemulihan Proporsi limfosit dan eosinofil meningkat. Jumlah darah secara bertahap normalisasi.

Pemisahan ke dalam fase ini hanya mencerminkan reaksi darah secara keseluruhan.

Pergeseran neutrofil nuklear pada tuberkulosis

Selain kuantitatif, kelompok neutrofil memiliki karakteristik kualitatif, yang jauh lebih tipis dan lebih awal menunjukkan berbagai proses patologis.

Tuberkulosis dewasa biasanya merupakan proses sekunder, paling sering hanya menyebabkan peningkatan neutrofil stab di dalam darah. Dengan bentuk infiltratif-pneumonia dan fenomena disintegrasi jaringan paru, pergeseran neutrofil ke kiri terungkap cukup jelas dan dapat mencapai hingga 20-30% inti pita.

Infiltrasi paru tidak hancur, dan bentuk fokus tuberkulosis pada periode pendeteksian pertama atau eksaserbasi pada suhu sub-demam dan gangguan fungsional tingkat rendah memberikan pergeseran yang kurang jelas. Namun, unsur-unsur hemogram yang tersisa mungkin tidak mendeteksi kelainan sama sekali. Oleh karena itu, definisi menyeluruh dari pergeseran nuklir menjadi sangat penting dalam tuberkulosis.

Doktrin pergeseran nuklir neutrofil diajukan oleh Arnet (1905) berdasarkan studi darah dalam berbagai infeksi, termasuk tuberkulosis.

Membuat perhitungan yang rumit dengan banyak sketsa, Arneth memperhatikan beberapa keteraturan dalam konfigurasi inti neutrofil. Darah orang yang sehat mengandung:

  • 5% neutrofil dengan wafer murni, nukleus non-segmentasi (kelas I);
  • 35% neutrofil dengan dua segmen dihubungkan oleh penyempitan mirip benang (kelas II);
  • 41% neutrofil dengan tiga segmen (kelas III);
  • 17% neutrofil dengan empat segmen (kelas IV);
  • 2% neutrofil dengan lima segmen (kelas V).

Selain segmentasi nukleus, Arnet memperhitungkan bentuknya. Jadi, untuk kelas ia memilih beberapa subclass sesuai dengan tingkat depresi nukleus yang tidak tersegmentasi. Kelas-kelas yang tersisa dibagi menjadi subclass tergantung pada bentuk segmen.

Pada infeksi, sebanding dengan tingkat keparahannya, jumlah bentuk multi-segmen menurun, jumlah segmen segmen tiga segmen (2-3 segmen) dan non-tersegmentasi (menjadi sel yang relatif muda) meningkat. Dalam skema Arneth, jumlah neutrofil kelas I yang tidak teridentifikasi ditampilkan di sebelah kiri; di sebelah kanan, jumlah sel kelas II berada, kemudian kelas III, dan seterusnya. Akibatnya, dengan peningkatan bentuk-bentuk non-segmentasi dan segmen rendah, jumlah sel di sisi kiri sirkuit meningkat dan ada "shift kiri".

Analisis urin

Ekskresi urin pada pasien tuberkulosis hampir normal. Perubahan patologis dalam urin dapat terjadi pada kekalahan tuberkulosis ginjal atau saluran kemih.

Pada pasien dengan tuberkulosis paru kronis, tanda-tanda amiloidosis dapat dideteksi.

35. Nilai diagnostik tes darah dan urin pada pasien dengan tuberkulosis.

Tes darah Hemoglobin dan sel-sel darah merah dalam banyak kasus tetap tidak berubah, dengan pengecualian dari kasus-kasus yang disertai dengan kehilangan darah akut. Indikator yang menunjukkan adanya proses TB aktif adalah tingkat sedimentasi eritrosit. ESR dipercepat adalah karakteristik tidak hanya dari tuberkulosis aktif segar, tetapi juga untuk eksaserbasi dari proses kronis. Indikator yang tersisa dari tes darah sangat bervariasi tergantung pada sifat cedera paru-paru. Perubahan dalam indikator perifer. darah saat tuberk. tanpa spesifitas, bagaimanapun, hemogram membantu diagnosis. fase tuberk. memproses dan mengevaluasi beban. alirannya. Orang yang disurvei untuk tuberkulosis dan pasien dengan tuberkulosis. ditugaskan ke irisan umum. tes darah dengan definisi ESR, isi eritr. dan leukot., konsentrasi hemoglobin, dan perhitungan formula leukosit. Pasien dengan tuberkulosis dengan adanya pyemia direkomendasikan. tentukan jumlah retikulosit untuk menilai regenerasi. kemampuan sumsum tulang, dalam kasus diagnostik diferensial - jumlah trombosit. Hematologi berubah. indikator bergantung, di satu sisi, pada lokalisasi, sifat dan keparahan inf. proses, di sisi lain - dari keadaan tubuh, cadangan kompensasi. Hemogram har. bukan fase proses dari wedge-nya. formulir. Misalnya, pada pasien dengan bentuk tuberkulosis yang merusak umum dengan proses kompensasi dan tidak adanya peradangan segar. Perubahan gambaran darah bisa normal. Asah tabung. proses ini biasanya disertai dengan pergeseran tusukan neutrofil, limfopenia dan peningkatan ESR. Total isi leukosit na. kebanyakan pasien dalam kisaran normal. Hanya saja yang akut dan berat ditandai dengan peningkatan kandungan leukosit dalam darah hingga 15 x 109 / l. Pergeseran neutrofilik dari formula leukosit ke kiri pada saat yang sama menjadi lebih signifikan. Dalam kasus-kasus penyakit yang parah (terutama di tuberculosis milier), reaksi leukemoid tipe myeloid dapat terjadi. Relief proses akut menyebabkan normalisasi perubahan ini, munculnya limfositosis. Neutropenia dan limfositosis dapat diamati pada tuberkulosis hematogen menyebar kronis dan fokus.

Analisis urin Dalam analisis urin pada pasien dengan tuberkulosis paru, tidak ada penyimpangan nyata dari norma. Perubahan hanya muncul pada lesi tuberkulosis ginjal dan saluran kemih. Urineisis rutin untuk tuberkulosis tidak hanya diperlukan jika kerusakan ginjal dicurigai. Terakhir huruf dia satu. untuk diagnosis dini. Kehadiran nanah dalam urin, dan yang paling penting, tuba. Bakteri, tentu saja, menunjuk ke bak mandi. ginjal. Namun, terkadang diperlukan untuk mengulang. Terbitkan. urine untuk mendeteksi ahli patologi. menemukan; jadi dengan beberapa. bentuk tuberkulosis tes urin bulanan (bentuk disebarluaskan, rumit primer. kompleks). Perubahan kecil dalam urin dalam bentuk jejak protein, tunggal. leukosit dan eritrosit segar secara berkala dapat dideteksi sebagai fenomena keracunan umum. Akhirnya, beberapa reaksi dengan urin memberikan indikasi keparahan proses. Diantaranya adalah munculnya reaksi diazo selama generalisasi. bentuk tuberkulosis, terutama dengan tuberkulosis milier.

Tidak diragukan lagi, nilai prognostik dalam perjalanan tuberkulosis memiliki solusi urochromogenic. Ini sangat sederhana, dan ini adalah keuntungannya. Dia diproduksi. selanjutnya Cara: ambil urine yang tersaring dan encerkan 10 kali. Tuangkan ke dalam dua tabung, satu berfungsi sebagai kontrol, dan larutan kalium permanganat 1: 1000 ditambahkan ke yang lain.Sebuah reaksi positif dalam tabung menghasilkan pewarnaan kenari tajam, yang sangat jelas terlihat bila dibandingkan dengan kontrol. Perlu untuk memperhitungkan hanya diungkapkan dengan baik. mewarnai. Mekanisme reaksi adalah bahwa kalium permanganat mengoksidasi urochromogen tidak berwarna dalam urin, yang meningkat secara signifikan dalam kasus tuberkulosis progresif.

Apa tes untuk tuberkulosis paru?

Tes laboratorium lulus semua pasien. Karena patologi menular ke orang lain, studi tepat waktu tentang materi biologis berkontribusi pada akurasi dalam diagnosis dan membantu mengendalikan jalannya pengobatan.

Daftar tes laboratorium untuk tuberkulosis paru

Daftar tes untuk tuberkulosis

Daftar tes wajib untuk tuberkulosis paru adalah sebagai berikut:

  • pemeriksaan dahak - di hadapan rongga, tubuh beras, protein, serat elastis, garam kalsium ditemukan di dalamnya;
  • analisis eksudat - menunjukkan neutrofil dan sel endotel dengan dominasi leukosit;
  • analisis lavage bronchoalveolar menunjukkan jumlah makrofag alveolar yang berkurang dengan peningkatan neutrofil yang tajam dengan proses tuberkulosis aktif, dan dengan tidak aktifnya indikator makrofag sedikit meningkat;
  • tes serologi, atau immunoassays enzim, diuji untuk penentuan serum imunoglobulin untuk antigen mikobakteri. Rasio titer antibodi diagnostik terhadap agen penyebab penyakit melebihi nilai 1: 8.

Apa yang ditunjukkan hasil tes darah?

Karena analisis biokimia darah dalam tuberculosis paru, spesialis memiliki kemampuan untuk menentukan arah perubahan protein dan fraksinya dalam serum darah. Ini menentukan bentuk dan tahap penyakit. Kadar asam urat, tembaga, kolesterol dan lisozim terlampaui. Aktivitas creatine kinase dan angiotensin converting enzyme diamati. Asidosis respiratorik berkembang karena penurunan pH dan peningkatan pCO2.

Berkenaan dengan hemoglobin, pengurangan mereka, yang mengarah ke pengembangan anemia, tidak khas untuk proses tuberkulosis.

Urinalisis pada pasien tuberkulosis

Apakah tes urin untuk tuberkulosis paru?

Ekskresi urin pada pasien TB tetap normal. Perubahan patologis biasanya terjadi jika ginjal dan saluran kemih terlibat dalam proses tuberkulosis. Pada pasien dengan bentuk kronis penyakit, tanda-tanda amiloidosis dapat dideteksi selama penelitian.

Apa analisis urin untuk tuberkulosis paru, informasi apa yang mengindikasikan perkembangan dalam tubuh proses patologis?

  1. Kepadatannya adalah 1.015 - 1.025.
  2. Kehadiran tunggal eritrosit diperbolehkan, pada anak-anak - tidak lebih dari 5.
  3. Sel darah putih tidak boleh lebih dari 2 unit, untuk wanita dan anak perempuan - hingga 5 unit.
  4. Nilai garam seharusnya tidak signifikan.
  5. Nilai yang diizinkan dari epitel pipih adalah hingga 5 unit.

Apa yang akan tes darah untuk tuberkulosis paru

Tuberkulosis adalah penyakit yang berbahaya dan sulit untuk diobati. Efektivitas pengobatan tergantung pada seberapa tepat waktu terdeteksi. Tidak ada yang diasuransikan terhadap infeksi, benar-benar semua orang bisa sakit - orang dewasa, anak-anak, orang tua.

Dengan tidak adanya perawatan yang diperlukan tepat waktu, formulir tertutup berubah menjadi satu terbuka yang berbahaya, oleh karena itu, diagnosis pada tahap awal penyakit ini sangat penting, dan ini dapat dicapai dengan pemeriksaan rutin dan komprehensif.

Dalam artikel ini, kita akan melihat berbagai metode untuk mendiagnosis penyakit paru ini, dan juga mencoba untuk menentukan tes darah untuk tuberkulosis paru yang paling dapat diandalkan dan informatif.

Ketika perlu untuk memeriksa tuberkulosis

Jadi, pemeriksaan diperlukan untuk:

  • kontak dengan pembawa penyakit;
  • kelemahan umum;
  • penurunan berat badan;
  • peningkatan suhu di malam hari;
  • batuk kronis.

Sangat penting untuk menentukan pada waktunya kehadiran tuberkulosis pada masa kanak-kanak, karena sangat mungkin pada anak-anak bahwa infeksi akan menyebabkan proses patologis lebih lanjut dalam tubuh.

Itu penting! Salah satu tindakan pencegahan adalah vaksinasi BCG pada hari ke-4 kehidupan seorang anak dan pada usia 7 tahun. Tubuh anak lebih lemah daripada orang dewasa, jadi penting untuk melindunginya dari infeksi dan meletakkan vaksinasi.

Penelitian untuk dugaan tuberkulosis

Tuberkulosis dapat dideteksi dengan beberapa cara.


Foto 1. Fragmen X-ray dada pasien dengan tuberkulosis. Fluorografi adalah salah satu metode yang paling dapat diandalkan untuk mendiagnosis penyakit ini, tetapi paling efektif dalam kombinasi dengan yang lain. Sebagai contoh, tes darah yang terperinci akan menunjukkan tuberkulosis bahkan pada tahap awal.

  1. Pemeriksaan X-ray Fluorografi akan membantu mengevaluasi tingkat kerusakan paru-paru. Namun, harus diingat bahwa gambar X-ray tidak akan menunjukkan tahap awal penyakit. Survei harus komprehensif. Untuk pemeriksaan yang lebih lengkap, paru-paru pasien harus difoto baik dari depan dan dari belakang.
  2. Tes tuberkulin. Ketika memeriksa anak-anak, tes tuberkulin paling sering digunakan (tes Mantoux). Tuberkulin adalah campuran protein yang diisolasi dari patogen mati. Pengenalan obat di bawah kulit menyebabkan reaksi kekebalan, yang memanifestasikan dirinya dengan cara yang berbeda. Jika tidak ada patogen di tubuh, maka setelah beberapa hari suntikan akan meninggalkan tanda yang hampir tidak terlihat. Dengan peradangan tempat suntikan atau pembentukan abses, kemungkinan infeksi pasien tinggi.

Itu penting! Tes Mantoux tidak memungkinkan untuk menentukan keberadaan tuberkulosis dengan probabilitas 100%, namun, akan membantu menentukan kelompok risiko untuk penyakit. Dengan tes perawatan harus dilakukan untuk mereka yang menderita alergi. Tubuh dapat bereaksi terhadap pengenalan komposisi dengan cara yang tidak dapat diprediksi.

  1. Tes darah Hasilnya membantu mendeteksi jejak patogen. Ditunjuk untuk mengidentifikasi diagnosis akhir dan luasnya penyakit.
  2. Komposisi mulut. Kehadiran mycobacterium tuberculosis memungkinkan untuk mengidentifikasi dan mempelajari sputum. Materi yang ditemukan melebihi norma indikator protein, yang membedakannya dari sputum bronkial, serta agen infeksi.

Apakah mungkin untuk menentukan tuberkulosis dengan tes darah umum?

Komposisi sel darah merah (sel merah) di hadapan bakteri sedikit berbeda. Perdarahan usus akut atau pulmonal memprovokasi anemia, penurunan hemoglobin yang signifikan.

Ada orang yang meragukan apakah mungkin untuk menentukan tuberkulosis dengan tes darah. Bahkan, analisis umum mampu mengidentifikasi mengembangkan proses inflamasi dan patologis dalam tubuh sesuai dengan peningkatan indikator ESR. Peningkatan laju tidak hanya menunjukkan aktivitas dan durasi peradangan saat ini, tetapi juga eksaserbasi kronis, terutama pada tahap akhir penyakit.


Foto 2. Dokter melakukan prosedur untuk mengumpulkan darah dari vena pasien dengan jarum suntik. Setelah itu, tes darah akan dilakukan, dengan tuberkulosis, indikator yang akan menunjukkan proses inflamasi.

Itu penting! Tingkat ESR dapat disalahartikan dengan indikator untuk peradangan atau kanker paru. Dalam hal ini, perlu untuk menyelidiki jumlah eosinofil (salah satu jenis sel darah putih). Jika eosinofil membesar, dan formula leukosit menunjukkan perubahan dramatis dalam tes darah, ini terjadi dengan tuberkulosis, dan dikeluarkan dengan pneumonia.

Apakah tes darah klinis dan biokimia akurat?

Tes darah untuk tuberculosis paru sering tidak cukup untuk mendiagnosis tubercle bacillus. Maka pemeriksaan komprehensif lebih lanjut diperlukan. Hal yang sama dapat dikatakan tentang analisis biokimia darah. Dalam kasus tahap awal tuberkulosis atau bentuk laten, kemungkinan besar tidak akan menunjukkan kelainan apa pun. Dan hanya dalam bentuk akut dari penyakit, koefisien albumin-globulin di dalamnya akan diturunkan.

Jenis tes darah untuk antibodi terhadap tuberkulosis

Ada yang lebih akurat, mendalam daripada OAK, metode pengujian darah, yang memungkinkan untuk mendeteksi tuberkulosis. Cara menentukan dari tes darah seperti itu, jika Anda memiliki penyakit, pertimbangkan berikutnya.

Menetapkan diagnosis obyektif adalah mungkin menggunakan pendekatan polymerase chain reaction (PCR) dan enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).

Apakah metode ELISA menunjukkan adanya tuberkulosis

Dengan bantuan ELISA, kehadiran antibodi patogenik pada pasien terdeteksi. Metode ini nyaman karena memungkinkan Anda untuk secara bersamaan memeriksa sejumlah besar sampel. Namun, ia memiliki sensitivitas rendah dan direkomendasikan untuk digunakan di daerah dengan tingkat insiden rendah.

Perubahan apa yang diungkapkan oleh metode PCR?

Metode PCR termasuk yang paling efisien. Ini digunakan untuk mengidentifikasi penyakit, menentukan tingkat keparahan dan remisi selama pengobatan dengan menemukan DNA mikroba.

PCR digunakan untuk:

  • deteksi tongkat progresif Koch;
  • tes untuk mendeteksi tuberkulosis ekstrapulmoner;
  • pembentukan foci yang cepat untuk lokalisasi infeksi;
  • diagnosis kekambuhan penyakit;
  • memantau jalannya pengobatan.

Baik dia dan tes darah lainnya untuk antibodi terhadap tuberkulosis dianggap cukup andal. Tapi ada yang lain.

Metode tes darah alternatif

Metode Interferon Gamma Release Assays kurang umum dibandingkan PCR dan ELISA untuk mendeteksi mikroba patogen. Ini dapat dilakukan bukan tes tuberkulin. Reaksi menunjukkan pembentukan interferon gamma sebagai respons terhadap pengenalan mikrobakteria. Hasilnya dapat secara akurat menentukan keberadaan infeksi.

Metode penelitian alternatif lain adalah QuantiFERON-TB Gold. Metode ini paling sering digunakan untuk menguji anak-anak yang memiliki reaksi alergi yang kuat terhadap tes tuberkulin.

Itu penting! Kedua metode tidak memungkinkan untuk menentukan tingkat infeksi - aktif atau laten.

Dokter yang bertugas menentukan jenis tes darah yang akan digunakan. Paling sering, penelitian dilakukan di kompleks. Tes darah untuk tuberkulosis laten mungkin tidak memberikan hasil sama sekali.

Bagaimana indikator tes darah

Ketika menafsirkan tes darah umum, perhatian harus diberikan pada tingkat ESR, hemoglobin, leukosit.

Tingkat ESR pada orang yang sehat akan kurang dari 50 unit, kelebihan indikator ini menunjukkan proses peradangan dalam tubuh.

Jumlah leukosit dalam darah pasien dengan tuberkulosis mencapai 6 sampai 10 9 / l, pada kasus akut dan berat pada perkembangan penyakit - 12-15 hingga 10 9 / l.

Komposisi sel darah merah pada kebanyakan pasien tetap normal. Hemoglobin rendah dicatat dalam tuberkulosis milier, pneumonia caseous.

Bentuk penyakit akut, progresif dan rumit mengubah leukogram. Dalam beberapa kasus, leukositosis sedang terdeteksi (hingga 10.000–15.000 leukosit), lebih jarang leukopenia.

Apa pun yang Anda lakukan tes darah untuk tuberculosis paru, mengartikannya adalah pekerjaan profesional yang berpengalaman. Hanya mereka yang dapat secara akurat menentukan bagaimana tuberculosis berjalan, jika masih terdeteksi. Analisis ELISA dan PCR di-decode sama. Pada formulir khusus, hasil negatif atau positif ditunjukkan berlawanan dengan infeksi yang ditentukan.

Jenis tes untuk perawatan

Kesulitan perawatan terletak pada fakta bahwa infeksi dapat menjadi kebal terhadap jenis antibiotik apa pun, terutama pada tahap lanjut, serta periode inkubasi panjang selama itu tidak mungkin untuk menentukan infeksi.

Setelah mengidentifikasi dan meresepkan terapi yang tepat, proses penyembuhan dipantau pada interval 1-2 kali per bulan. Pasien memberikan darah dan dahak.


Foto 3. Meja medis di kantor dokter setelah dahak pasien dikumpulkan. Sampel sputum ditutup dalam tabung plastik dan menunggu pengujian laboratorium.

Anda dapat mengambil jumlah darah lengkap, tes Mantoux, dan Anda dapat menjalani fluorografi di hampir semua pusat medis, ini dilakukan segera jika muncul kecurigaan. Berdasarkan data yang diperoleh, terapis akan membuat kesimpulan tentang tidak adanya perubahan patologis dalam tubuh atau akan mengeluarkan rujukan untuk pemeriksaan lebih lanjut dalam tubdispanser.

Studi khusus dan lebih akurat dilakukan di klinik TB, yang dilengkapi dengan laboratorium dan reagen yang diperlukan untuk penelitian.

Jadi, menyimpulkan hal di atas:

  • tuberkulosis adalah penyakit berbahaya yang sangat penting untuk dideteksi pada waktunya;
  • peningkatan ESR, penggelapan di paru-paru, perubahan leukogram memberikan dasar untuk mengirim pasien untuk pemeriksaan lebih lanjut untuk mendeteksi infeksi;
  • pengobatan dilakukan dengan bantuan obat anti-TB; Tahap perawatan intensif berlanjut sampai indikator klinis dan radiologis yang positif diperoleh.

Video yang berguna

Kami menawarkan untuk menonton video, yang juga menjawab pertanyaan apakah mungkin untuk mendeteksi tuberkulosis melalui tes darah. Ini menjelaskan secara lebih rinci tentang QuantumFERON TB Gold quantifone test, yang menunjukkan dalam analisis tuberkulosis darah oleh respon imun.

Mengartikan hitung darah lengkap untuk tuberkulosis pada orang dewasa dan anak-anak

Infeksi dengan tubercle bacillus tidak lagi menjadi hukuman bagi seseorang. Obat modern menggunakan alat yang efektif untuk memerangi penyakit ini, jika terdeteksi pada tahap awal. Pemeriksaan dan tes pencegahan rutin, termasuk tes darah umum untuk tuberkulosis, membantu mendeteksi patologi pada waktunya.

Perubahan dalam gambaran klinis

Hitung darah lengkap untuk tuberculosis paru (UAC) tidak memiliki manifestasi khusus. Tidak ada penanda yang berbicara tentang perkembangan tuberkulosis, dan menentukan stadium penyakit. Tetapi dengan tanda-tanda non-spesifik seseorang dapat menilai tentang proses inflamasi laten dan mencurigai perubahan di paru-paru.

Penyimpangan sel darah merah dari norma

Dengan bentuk lesu atau lesi lokal, jumlah eritrosit dalam darah tidak berubah, tetapi warnanya berubah. Tingkat hemoglobin dalam eritrosit berkurang. Kondisi ini disebut hipokromia.

Dengan lesi infiltratif signifikan dari jaringan paru-paru, tes darah klinis menunjukkan penurunan jumlah sel darah merah, penurunan ukuran mereka. Sel yang belum matang muncul - retikulosit, yang merupakan “prekursor” sel darah merah. Pada tahap awal tuberkulosis, jumlah retikulosit tidak melebihi 0,5%.

Anemia berat lebih sering terjadi pada orang dewasa dengan tuberkulosis lanjut. Pada saat yang sama, jumlah retikulosit meningkat menjadi 1% dari total jumlah sel darah merah.

Leukocyte Shift

Leukosit sebagai sel-sel sistem kekebalan tubuh digunakan sebagai respons terhadap penyakit di tempat pertama. Menurut tes darah umum dan studi leukogram, baik kehadiran proses inflamasi dan tahapnya ditentukan.

Dengan bentuk tertutup yang tidak rumit, ada peningkatan yang signifikan dalam jumlah neutrofil - sel darah putih yang bertanggung jawab untuk melawan infeksi bakteri. Promyelocytes muncul - sel leukosit imatur, yang biasanya tidak terjadi.

Panjang, keras mengalir, tuberkulosis paru disertai dengan perubahan degeneratif pada neutrofil, pembentukan granularitas patologis. Jumlah eosinofil menurun tajam. Ada limfopenia - pengurangan jumlah limfosit. Semua tanda-tanda ini menunjukkan proses peradangan yang berkepanjangan, disertai dengan pembentukan nanah dan massa nekrotik.

Perubahan ESR

Penentuan tuberkulosis dalam fase aktif membantu ESR - indikator tingkat sedimentasi eritrosit. Akumulasi imunoglobulin, fibrinogen, berkontribusi pada pengendapan sel darah merah dan curah hujannya yang cepat. Biasanya, parameter darah pada pria tidak lebih tinggi dari 10 mm / jam, pada wanita - 15 mm / jam. Akselerasi ESR hingga 80mm / jam menunjukkan aktivasi proses peradangan di tubuh.

Menampilkan indikator pada anak-anak

Tes darah untuk tuberkulosis pada anak tidak jauh berbeda dengan perubahan pada orang dewasa. Penguraian hasil dilakukan pada indikator yang sama:

  • Pada fase awal penyakit, rumus eritrosit berubah sedikit. Anemia hanya dapat terjadi dalam bentuk yang merusak. Dalam kasus lain, jumlah sel darah merah tetap tidak berubah, sementara persentase eritrosit yang belum matang meningkat. Tuberkulosis pada anak dapat dicurigai ketika retikulosit terdeteksi di atas 1 ppm.
  • Indikator leukosit juga mengalami perubahan. Leukositosis berkembang - peningkatan jumlah sel darah putih karena neutrofil, dan jumlah limfosit menurun tajam. Pada norma untuk anak di atas 6 tahun 40%, jumlah limfosit di tuberkulosis tidak lebih dari 20%.

Pada tahap awal penyakit, jumlah eosinofil tumbuh - sel yang bereaksi terhadap reaksi alergi. Penurunan tajam di dalamnya menunjukkan bahwa proses memasuki fase aktif.

  • Pada anak-anak, ESR tidak melebihi 10mm / jam. Akselerasi ke 50mm / h mengindikasikan mobilisasi pertahanan tubuh untuk melawan proses inflamasi.

Pada seorang anak, tahap awal penyakit sering terjadi tanpa gejala yang jelas atau disamarkan oleh ARVI.

Perubahan tergantung pada stadium penyakit

Apakah mungkin untuk menetapkan keberadaan fokus TB dengan bantuan tes darah laboratorium? Sayangnya tidak. Hitung darah lengkap untuk tuberkulosis mampu mendeteksi proses inflamasi hanya pada tahap-tahap tertentu dari penyakit.

  1. Pada tahap infiltrasi, leukosit bereaksi sedikit, dan ESR meningkat.
  2. Pada tahap disintegrasi, diucapkan perubahan dalam rumus leukosit dan eritrosit terjadi.
  3. Bentuk disebarluaskan selama analisis akan memberikan lebih jelas penyimpangan yang disebutkan di atas.
  4. Ketika proses inflamasi mereda atau proses pemulihan, darah merah kembali normal, jumlah dan rasio leukosit dipulihkan.
  5. Bentuk tuberkulosis paru yang tidak aktif tidak terdeteksi oleh pemeriksaan darah umum.

Deteksi dini tuberkulosis merupakan prasyarat untuk pengobatan yang berhasil, dan penghitungan darah lengkap adalah metode yang memungkinkan mendeteksi proses inflamasi laten pada waktunya. Dan meskipun analisis ini tidak dianggap sebagai metode penelitian yang khusus, adalah mungkin untuk menutupi sejumlah besar orang dalam waktu singkat. Dalam kasus deteksi kelainan pada gambaran klinis yang khas, analisis spesifik tuberkulosis dan fluorografi diresepkan.

Siapa bilang tidak mungkin menyembuhkan tuberkulosis?

Anda telah didiagnosis dengan tuberkulosis. Anda memenuhi semua resep dokter, tetapi tidak ada pemulihan. Segenggam pil sakit perut, mengejar kelemahan dan sikap apatis? Mungkin Anda harus mengubah pendekatan untuk perawatan.

Dokter tidak dapat mengatasi akar penyebab penyakit Anda. Baca kisah Helen, yang berhasil mengalahkan tuberkulosis apa pun yang terjadi. Baca artikel >>

Indikator ESR dalam tuberkulosis

Saat ini, menurut statistik, tuberkulosis adalah penyakit yang paling umum di antara orang-orang. Paling sering, penyakit ini menyerang anak-anak dan orang miskin. Perlu dicatat bahwa setiap tahun persentase orang sakit bertambah dua kali lipat. Dalam hubungan ini, obat dan metode baru sedang dikembangkan untuk pengobatan tuberkulosis.

Faktor utama yang berkontribusi terhadap perkembangan tuberkulosis adalah penurunan kekebalan, yang dapat disebabkan oleh pencemaran lingkungan. Adalah mungkin untuk mendiagnosa penyakit ini dengan bantuan tes dan dengan banyak cara lain.

Tes darah untuk tuberkulosis adalah indikator utama untuk menentukan penyakit pada manusia. Tuberkulosis adalah penyakit menular yang berbahaya. Perlu dicatat bahwa pada tahap yang lebih lanjut dari penyakit ini sangat sulit untuk diobati, sehingga sangat penting untuk memperhatikan penyakit pada waktunya dan memulai perawatan yang tepat di rumah sakit.

Cara tertular tuberkulosis

Penyakit ini memiliki mekanisme transmisi udara. Dengan demikian, infeksi dapat terjadi sebagai akibat masuknya patogen ke dalam tubuh melalui selaput lendir. Selain itu, tuberkulosis dapat ditularkan dari ibu yang sakit ke janin yang sedang berkembang.

Dalam hampir semua kasus, tuberkulosis mempengaruhi sistem pernapasan. Pisahkan bentuk ekstrapulmoner penyakit (mempengaruhi sistem pencernaan, sistem saraf pusat, mengganggu fungsi visual, sendi, sistem urogenital).

Sumber utama penyakit ini adalah mycobacterium - tongkat Koch. Ini mempengaruhi paru-paru, kulit, tulang dan banyak organ lainnya. Biasanya, tuberkulosis dapat menyebabkan kecacatan atau bahkan kematian. Namun, jika penyakit didiagnosis sedini mungkin, maka itu cukup bisa diobati.

Indikator ESR dalam tuberkulosis

Tes darah untuk penentuan tuberkulosis menunjukkan perjalanan klinis proses inflamasi. Biasanya, tingkat sedimentasi eritrosit adalah: pada pria, 1–10 mm / jam, pada wanita, 2–15 mm / jam.

Patogen, memasuki tubuh manusia, menyebabkan kerusakan pada jaringan dan organ berbagai sistem. Termasuk perubahan dalam jumlah darah. Jadi ketika terinfeksi dengan tongkat, ada peningkatan yang sangat kuat pada tingkat sedimentasi eritrosit. Jumlah leukosit juga meningkat, karena tubuh mengalami proses peradangan.
Sebagai aturan, tuberkulosis tidak menyebabkan perubahan signifikan pada sel darah merah. Perkembangan anemia kecil dan hemoglobin rendah dapat berkembang hanya dengan kehilangan darah yang signifikan. Dengan demikian, tuberkulosis disertai dengan kelebihan ESR secara signifikan lebih tinggi dari nilai normal.

Gejala

Gejala utama tuberkulosis meliputi:

  1. Demam;
  2. Berkeringat malam;
  3. Munculnya sesak nafas;
  4. Kering, batuk kuat disertai dahak (garis-garis darah mungkin ada);
  5. Kelelahan umum;
  6. Penurunan berat badan yang dramatis;
  7. Kelelahan cepat;
  8. Lethargy;
  9. Agresivitas;
  10. Kurang nafsu makan;
  11. Nyeri dada.

Anak-anak, berbeda dengan orang dewasa, paling rentan terhadap tuberkulosis. Oleh karena itu, Anda perlu memeriksa anak Anda secara teratur dan melakukan tes untuk mengidentifikasi tongkat Koch. Diagnosis yang tepat waktu memungkinkan Anda mencapai hasil positif tanpa konsekuensi serius.

Sebagian orang memiliki sistem kekebalan yang kuat. Dalam hal ini, gejala penyakit mulai muncul hanya pada tahap selanjutnya. Ketika kekebalan melemah, gejala muncul di awal penyakit.
Tuberkulosis berkembang perlahan dan bertahap:

  • Bentuk utama.
    Berkembang segera setelah infeksi. Gejala utama pada tahap ini adalah pembengkakan kelenjar getah bening.
  • Laten (bentuk laten).
    Onset penyakit ini ditandai dengan tidak adanya gejala. Lebih lanjut, mereka muncul dalam bentuk rasa sakit tertentu ketika bernapas dan batuk, kurang nafsu makan, peningkatan berkeringat, dan cepat lelah. Formulir ini dapat dianggap tidak menular.
  • Buka formulir.
    Bentuk paling serius dari penyakit ini. Untuk perawatan, perlu untuk melindungi orang yang sakit dari orang lain di institusi medis tertutup. Ini untuk memastikan keamanan bagi orang-orang di sekitar mereka.
  • Bentuk sekunder.
    Diamati sebagai akibat infeksi ulang.

Diagnosis tuberkulosis

Deteksi penyakit ini dipersulit oleh kesamaan gejala pertama dengan bronkitis kronis. Peran utama dalam diagnosis tuberkulosis adalah mengambil tes tepat waktu dari calon pasien. Jadi jika seorang pasien diduga menderita tuberkulosis, penelitian sputum dilakukan. Untuk melakukan ini, sputum dikumpulkan pada siang hari dan dikirim ke laboratorium untuk mendeteksi mycobacteria.

Perlu dicatat bahwa diagnosis tuberkulosis memiliki metode lain untuk memeriksa pasien.

Cara paling efektif untuk mendiagnosis penyakit adalah:

  1. Tes darah B / x;
  2. Analisis urin;
  3. Analisis dahak;
  4. Tes Mantoux, Pirque;
  5. CT (computed tomography);
  6. Tes darah serologis (ELISA, PCR);
  7. Bronkoskopi;
  8. Biopsi;
  9. Tusukan pleura;
  10. Fluorografi;
  11. Roentgenoskopi.

Perlu dicatat bahwa tuberkulosis disertai dengan peningkatan konsentrasi kolesterol, lisozim, asam urat dan Cu dalam serum darah. Berdasarkan ini, semua perubahan tuberkulosis bisa sangat spesifik.

Setiap bentuk penyakit berbeda dalam hal tingkat keparahan, diagnosis, dan pengobatan. Karena itu, ketika gejala pertama muncul, Anda harus segera berkonsultasi dengan dokter dan tidak mengobati diri. Karena Anda hanya bisa memperburuk situasi dan memperburuk kondisi Anda.

Saat ini, ada banyak obat yang efektif melawan agen penyebab tuberkulosis. Peran utama dalam pemulihan seseorang dimainkan oleh diagnosis yang tepat waktu dan terapi yang kompeten. Juga, kondisi umum pasien tergantung pada proses pemulihan setelah penyakit. Jadi, jika Anda mematuhi semua rekomendasi medis, Anda dapat mengurangi risiko infeksi ulang.

Diagnosis laboratorium tuberkulosis

Tuberkulosis adalah penyakit yang mudah didiagnosis dalam kondisi saat ini dan prestasi ilmiah. Diagnosis laboratorium tuberkulosis merupakan pusat metode diagnostik lain, kedua hanya untuk metode x-ray.

CBC

Pada pasien dengan tuberkulosis, perubahan dalam tes darah umum tidak bersifat patognomonik. Dengan bentuk tuberkulosis yang terbatas dan tidak aktif, hipokromia eritrosit adalah khas untuk jumlah normalnya. Dengan infiltrat besar atau pneumonia caseous, dengan limfadenitis kaseous luas, lesi spesifik usus, serta dengan perdarahan paru-paru atau postoperatif yang besar, erythropenia dan microcytosis, oligochromasia, polychromasia dicatat. Makrositosis, dan bahkan lebih jadi poikilocytosis jauh lebih jarang, biasanya dengan anemia berat. Jumlah retikulosit dengan tingkat tuberculosis kompensasi bervariasi dari 0,1 hingga 0,6%, dengan subkompensasi - 0,6-1,0%, dan 1% retikulosit adalah karakteristik dekompensasi.

Dalam kasus tuberkulosis, leukositosis sedang (hingga 15 ribu leukosit) dapat diamati pada beberapa kasus, lebih jarang leukopenia, yang ditemukan pada 2-7% kasus pada pasien dengan proses yang terbatas dan mudah dalam proses dan pada 12,5% - pada tuberkulosis paru destruktif dan progresif..

Paling sering terjadi pergeseran dalam rumus leukosit. Baik neutrofilia relatif dan absolut, pergeseran leukosit moderat ke kiri untuk promyelocytes dicatat. Myelosit sangat jarang ditemukan pada kasus tuberkulosis tanpa komplikasi. Peningkatan jumlah neutrofil dengan granularitas patologis pada hemogram pasien dengan tuberkulosis selalu menunjukkan durasi proses: pada pasien dengan tuberkulosis berat, hampir semua neutrofil mengandung granularitas patologis. Ketika wabah TB mereda, pergeseran nuklir datang ke keadaan normal relatif cepat. Granularitas abnormal dari neutrofil biasanya berlangsung lebih lama daripada perubahan lain pada hemogram.

Kandungan eosinofil dalam darah perifer juga bervariasi tergantung pada fase proses dan kondisi alergi tubuh. Jumlah mereka menurun hingga aneosinofilia selama wabah penyakit yang parah dan berkepanjangan dan, sebaliknya, meningkat dengan resorpsi infiltrat dan efusi pleura, serta dengan bentuk awal tuberkulosis primer.

Sebagian besar bentuk tuberkulosis primer disertai dengan limfopenia, yang kadang-kadang diamati selama beberapa tahun bahkan setelah perubahan spesifik pada jaringan parut. TBC sekunder pada fase akut, tergantung pada tingkat keparahan proses, dapat disertai dengan jumlah normal limfosit atau limfopenia.

Di antara tes untuk menilai proses TB, tempat khusus ditempati oleh penentuan tingkat sedimentasi eritrosit (ESR), yang penting dalam menilai jalannya proses tuberkulosis dan mengidentifikasi bentuk aktifnya. Peningkatan ESR menunjukkan adanya proses patologis (infeksi-inflamasi, purulen, septik, hemoblastosis, penyakit Hodgkin, dll) dan berfungsi sebagai indikator keparahannya, namun, indikator ESR yang normal tidak selalu menunjukkan tidak adanya patologi. Sedimentasi eritrosit dipercepat oleh peningkatan kadar globulin dalam darah, fibrinogen, kolesterol, dan penurunan viskositas darah. Perlambatan sedimentasi eritrosit adalah karakteristik kondisi yang melibatkan hemokonsentrasi, peningkatan kandungan albumin dan asam empedu.

Hemogram pada pasien dengan tuberkulosis berubah selama pengobatan. Perubahan hematologi menghilang lebih cepat, intervensi terapeutik yang lebih sukses. Namun, harus diingat efek pada hematopoiesis dari berbagai obat antibakteri. Mereka sering menyebabkan eosinofilia, dalam beberapa kasus - leukositosis, dan lebih sering leukopenia hingga agranulositosis dan reaksi reticular limfoid. Kontrol hematologi sistematis dan analisis yang benar dari data yang diperoleh sangat penting untuk menilai kondisi klinis pasien, dinamika proses dan efektivitas pengobatan yang diterapkan.

Urinalisis

Dengan tuberkulosis sistem urin, tes urin adalah metode diagnostik laboratorium utama. Anda dapat mengamati leukocyturia, erythrocyturia, proteinuria, hypoisostenuria, mycobacterium tuberculosis, bakteriuria nonspesifik.

Leukocyturia adalah gejala tuberkulosis sistem kemih yang paling umum sebelum kemoterapi spesifik dan tidak ditemukan hanya pada kasus luar biasa, misalnya, dengan penghapusan lumen ureter. Tes Nechiporenko (penentuan jumlah leukosit dalam 1 ml urin) membantu untuk menilai secara lebih obyektif derajat leukocyturia di nephrotuberculosis, dan dalam beberapa kasus untuk mengidentifikasinya dalam urinalisis normal. Namun, harus diingat bahwa leukocytouria dapat terjadi pada pielonefritis akut dan kronik, sistitis, uretritis, batu pada ginjal dan ureter.

Erythrocyturia. seperti leukocyturia. Ini dianggap sebagai salah satu tanda laboratorium tuberkulosis yang paling sering dari sistem genitourinari. Frekuensi hematuria tergantung pada prevalensi proses, itu meningkat dengan perkembangan proses tuberkulosis destruktif di ginjal. Erythrocyturia tanpa leukocyturia lebih karakteristik dari tahap awal tuberkulosis ginjal. Hematuria, yang berlaku atas leukocyturia, merupakan argumen penting yang mendukung tuberkulosis ginjal dalam diferensiasinya dengan pielonefritis nonspesifik.

Tes darah biokimia

Dalam tuberkulosis, perubahan dalam beberapa parameter biokimia sangat tergantung pada fase proses, komplikasi dan berbagai penyakit penyerta. Pada pasien dengan tuberkulosis paru dan organ lain yang tidak aktif, total protein dan fraksi protein serum darah tidak berubah dan menentukan kandungan normalnya.

Dalam bentuk akut penyakit, serta dalam eksaserbasi dan perkembangan bentuk kronis tuberkulosis, koefisien albumin-globulin menurun.

Penting dalam menilai keadaan fungsional dan kerusakan organik pada hati di tuberkulosis dan komplikasinya adalah penentuan dalam serum bilirubin langsung dan total, aspartat aminotransferase (ACT), alanine aminotransferase (ALT). Penentuan dinamis tingkat aminotransferase. bilirubin dalam pengobatan pasien dengan tuberkulosis, terutama dalam bentuk yang parah, merupakan komponen wajib dari pemeriksaan biokimia pasien dengan tuberkulosis dan dilakukan setiap bulan.

Evaluasi keadaan fungsional ginjal meliputi penentuan kreatinin serum dan perhitungan laju filtrasi glomerulus menggunakan rumus Cockroft-Gault. Perhitungan laju filtrasi glomerulus menggunakan tes Reberg memberikan hasil yang kurang akurat.

Tujuan utama dari studi biokimia dinamis pasien dengan tuberkulosis adalah untuk mengontrol jalannya proses, tepat waktu mengidentifikasi efek samping obat dan koreksi yang memadai dari gangguan homeostasis yang dihasilkan.

Penggunaan metode penelitian biokimia untuk tuberkulosis ekstrapulmoner

Indikator yang paling informatif mempertimbangkan kandungan asam tuberculostearic dalam cairan biologis, tetapi definisinya penuh dengan kesulitan teknis (kebutuhan untuk menggunakan kromatografi gas dan spektrometri massa).

Hal ini menjanjikan untuk mengukur aktivitas deaminase adenosin, enzim yang terdeteksi dalam cairan: sinovial, perikardial, asites, atau serebrospinal. Produsen utama deaminase adenosin adalah limfosit dan monosit. Penentuan aktivitas deaminase adenosin dalam cairan biologis memfasilitasi diagnosis sinovitis tuberkular, tuberkulosis kelenjar getah bening, meningitis TB, tuberkulosis serositis.

Beberapa parameter biokimia karena mereka tidak spesifik ditentukan hanya dalam cairan biologis yang dekat dengan lesi. Tingkat indikator diukur sebagai respons terhadap pemberian tuberkulin subkutan atau intrakutaneus (biasanya sebelum pemberian dan 48 dan 72 jam setelahnya). Setelah itu, tingkat peningkatan tingkat penanda (dalam%) dalam kaitannya dengan tingkat awal dihitung.

Penentuan optimal dalam urin dari aktivitas transamidinase enzim spesifik organ, terjadinya yang dicatat dengan kerusakan ginjal dari berbagai alam. Studi tentang transaminidase dibenarkan hanya dalam kondisi pemberian tuberkulin subkutan untuk memperburuk proses inflamasi lokal. Aktivitas transamidinase dalam urin ditentukan pada awal dan 24-72 jam setelah pemberian 50 TE tuberkulin. Peningkatan fermenturia sebanyak 2 kali dan lebih memungkinkan pada 82% kasus untuk membedakan tuberkulosis aktif ginjal dari eksaserbasi pielonefritis kronik.

Pada tuberkulosis genital perempuan, konsentrasi haptoglobin dan malondialdehid dalam darah ditentukan dalam tes tuberkulin provokatif. Tuberkulin diberikan secara subkutan dengan dosis 50 TE dan, setelah 72 jam, dilakukan studi biokimia berulang. Dalam kasus etiologi tuberkulosis, tingkat peningkatan kadar haptoglobin setidaknya 28%, dan tingkat malondialdehyde - 39% atau lebih. Juga digunakan untuk menentukan aktivitas deaminase adenosin dalam cairan peritoneum yang berasal dari ruang Douglas. Tanda baca diperiksa ulang 72 jam setelah pemberian tuberkulin intradermal dalam dosis 0,1 TE dan 0,01 TE di area proyeksi organ genital internal pada dinding anterior abdomen. Dalam mendukung proses tuberkulosis, peningkatan aktivitas deaminase adenosin sebesar 10% atau lebih dibandingkan dengan yang awal adalah indikasi.

Dengan kerusakan mata, reaksi fokal yang terjadi di mata sebagai respons terhadap stimulasi antigenik diperiksa. Pada saat yang sama perkembangan tanggapan yang tidak diinginkan, disertai dengan penurunan fungsi visual. Karena penilaian reaksi fokal minimal sering sulit, untuk meramalkan kesimpulan, dianjurkan untuk fokus secara paralel pada tingkat peningkatan serum haptoglobin atau deaminase adenosin.

Semua studi biokimia harus dilakukan bersama dengan metode lain.

Tes Pembekuan Darah

Relevansi studi tentang keadaan sistem pembekuan darah dalam phthisiology adalah karena adanya perdarahan atau perdarahan paru pada sejumlah pasien dengan tuberkulosis, serta komplikasi hemocoagulasi dalam perawatan bedah tuberkulosis. Selain itu, hemocoagulasi intravaskular laten, yang secara alami bersamaan dengan tuberkulosis, mempengaruhi perjalanan penyakit dan efektivitas kemoterapi.

Pada pasien dengan tuberkulosis paru dengan dominasi komponen eksudatif peradangan, penurunan aktivitas antikoagulan darah diamati. Pada pasien dengan prevalensi rendah lesi spesifik di paru-paru dengan dominasi komponen produktif peradangan, hemocoagulasi intravaskular tidak begitu terasa. Pada pasien dengan tuberkulosis paru dengan hemoptisis dan perdarahan paru, keadaan sistem pembekuan darah berbeda: pada pasien dengan kehilangan darah rendah pada ketinggian hemoptoe atau segera setelah penghentian, peningkatan tajam dalam pembekuan darah diamati karena intensifikasi proses pembentukan thrombin sambil mempertahankan peningkatan kontraksi “struktural”. Pada pasien dengan kehilangan darah masif, penurunan potensi koagulasi diamati karena penurunan konsentrasi fibrinogen. aktivitas faktor XIII, jumlah trombosit. Pada tahap perawatan bedah pada pasien dengan bentuk tuberkulosis paru yang terbatas, tidak ada gangguan signifikan dengan sistem homeostasis. Pasien dengan proses umum ketika melakukan pneumonim atau pleuropneumonectomy sering mengembangkan DIC, yang dapat mengambil bentuk "penyakit kedua".

Untuk memantau keadaan sistem pembekuan darah pada pasien dengan tuberkulosis paru, perlu untuk menentukan waktu tromboplastin parsial yang diaktifkan (APTT), fibrinogen, waktu trombin, indeks protrombin, serta waktu perdarahan dan waktu pembekuan darah.

Studi hormonal

Pengamatan eksperimental dan klinis modern menunjukkan adanya perubahan dalam status hormonal pneumonia paru tertentu. Terbukti bahwa koreksi disfungsi sistem hipofisis-adrenal, hipofisis-tiroid dan fungsi pankreas dalam hubungannya dengan terapi anti-tuberkulosis berkontribusi pada aktivasi proses fibrogenesis dan perbaikan dalam fokus peradangan tertentu.

Status fungsional dari sistem hipofisis-tiroid dinilai oleh konten dalam serum triiodothyronine (T3), tiroksin (T4), thyroid stimulating hormon hipofisis (TSH). Telah ditetapkan bahwa hipotiroidisme subklinis terdeteksi pada 38-45% pasien dengan tuberkulosis paru, dan ini paling sering didiagnosis dalam bentuk-bentuk diseminata dan berserat-cavernous. Dengan bentuk-bentuk yang sama ini, tingkat seperti T paling berkurang secara drastis3,begitu dan t4, dan datanglah ketidakseimbangan hormon-hormon ini dalam bentuk meningkatkan rasio T4/ Ts.

Fungsi korteks adrenal dinilai oleh tingkat kortisol dalam serum darah, dan fungsi endokrin pankreas oleh konsentrasi insulin reaktif-imun. Pada fase akut penyakit menular, kebutuhan akan kortisol dan insulin endogen meningkat. Hiperinsulinemia juga menunjukkan resistensi insulin dari jaringan tubuh, yang merupakan karakteristik dari setiap proses inflamasi aktif, khususnya spesifik. Penentuan fungsi glukokortikoid dari kelenjar adrenal dengan tuberkulosis paru aktif mengungkapkan adanya hiperkortisme pada sebagian besar pasien. Indikator normal konsentrasi kortisol darah pada pasien dengan peradangan infeksi pada periode akut harus dianggap sebagai kekurangan relatif dari fungsi glukokortikoid dari korteks adrenal, yang dapat berfungsi sebagai dasar untuk terapi pengganti dengan dosis glukokortikoid yang adekuat.

Hampir sepertiga pasien dengan tuberkulosis paru dapat ditetapkan bahwa tingkat insulinminemia mereka cukup rendah dan mendekati batas bawah norma, sementara 13-20% melihat hiperinsulinisme yang signifikan. Kedua hypo-dan hiperinsulinisme relatif merupakan faktor risiko tinggi untuk perkembangan gangguan metabolisme karbohidrat dengan berbagai tingkat keparahan. Perubahan-perubahan dalam aktivitas fungsional sel-sel B pankreas membutuhkan kontrol glikemik secara teratur pada pasien dengan tuberkulosis dan pencegahan diabetes tepat waktu. Selain itu. Ini berfungsi sebagai alasan tambahan untuk penggunaan dosis fisiologis insulin dalam terapi kompleks tuberkulosis.

Secara umum, penurunan kadar hormon tiroid, ketidakseimbangan mereka, hiperkortisolemia dan hiperinsulinisme paling menonjol pada pasien dengan proses TB berat, dengan lesi paru-paru yang luas dan gejala keracunan tuberkulosa berat.

Diagnosis mikrobiologis tuberkulosis

Studi mikrobiologi diperlukan dalam mengidentifikasi pasien dengan tuberkulosis, memverifikasi diagnosis, memantau dan memperbaiki kemoterapi, mengevaluasi hasil pengobatan, dengan kata lain, dari saat pendaftaran pasien dengan tuberkulosis sampai penghapusan dari register.

Semua program dan proyek epidemiologi didasarkan pada perkiraan jumlah ekskreta bakteri yang tidak dapat dilakukan tanpa menggunakan metode laboratorium untuk mendeteksi mycobacterium tuberculosis. Ketika memeriksa negosiasi yang disebut populasi tidak terorganisir, persentase kotoran bakteri mencapai 70 atau lebih, yang membuat metode laboratorium cukup efektif untuk mengidentifikasi pasien dengan tuberkulosis di antara kelompok populasi ini.

Metode mikrobiologi tradisional untuk diagnosis tuberkulosis - studi bakterioscopic dan budaya. Metode modern mempertimbangkan penanaman mycobacterium tuberculosis dalam sistem otomatis, PCR. Namun, semua metode ini harus dikombinasikan dengan metode bakteriologis klasik.

Koleksi bahan diagnostik

Efektivitas studi laboratorium sangat tergantung pada kualitas bahan diagnostik. Kepatuhan dengan aturan untuk pengumpulan, penyimpanan dan pengangkutan bahan diagnostik dan penerapan yang tepat dari algoritma untuk memeriksa pasien secara langsung mempengaruhi hasil dan memastikan keamanan biologis.

Untuk penelitian tentang tuberkulosis menggunakan berbagai bahan. Karena fakta bahwa tuberkulosis paru adalah bentuk tuberkulosis yang paling umum, sputum dan jenis sekresi pohon trakeobronkial lainnya dianggap sebagai bahan utama untuk penelitian: pembuangan saluran pernapasan bagian atas diperoleh setelah aerosol inhalasi: air bilasan bronkus; lavages bronchoalveolar; bahan yang diperoleh dengan bronkoskopi, transtrakeal dan intrapulmonary biopsi: aspirasi dari bronkus, apusan laring, eksudat, noda dari luka, dll.

Efektivitas penelitian meningkat jika mereka melakukan pengumpulan bahan terkontrol dari pasien. Untuk melakukan ini, alokasikan ruang khusus yang disediakan atau belilah kabin khusus. Mengumpulkan material adalah prosedur yang berbahaya, jadi Anda perlu mengumpulkan bahan untuk penelitian, mengikuti aturan keamanan infeksi.

Bahan untuk penelitian tentang mycobacterium tuberculosis dikumpulkan dalam botol steril dengan tutup yang dikunci rapat untuk mencegah kontaminasi lingkungan dan untuk melindungi bahan yang terkumpul dari kontaminasi.

Botol untuk mengumpulkan bahan diagnostik harus memenuhi persyaratan berikut:

  • harus terbuat dari material yang tahan benturan;
  • harus meleleh dengan mudah selama autoklaf;
  • cukup volume (40-50 ml):
  • memiliki bukaan lebar untuk pengumpulan dahak (diameter tidak kurang dari 30 mm);
  • agar mudah digunakan, transparan atau tembus cahaya, sehingga Anda dapat menilai kuantitas dan kualitas sampel yang terkumpul tanpa membuka tutupnya.

Untuk mendapatkan hasil penelitian yang optimal, kondisi berikut harus dipenuhi:

  • pengumpulan bahan dilakukan sebelum dimulainya kemoterapi;
  • bahan untuk penelitian harus dikumpulkan sebelum asupan makanan dan obat-obatan pagi;
  • untuk penelitian itu diinginkan untuk mengumpulkan setidaknya 3 sampel sputum pagi. Kumpulkan dahak selama 3 hari berturut-turut;
  • Materi yang dikumpulkan harus dikirim ke laboratorium sesegera mungkin:
  • dalam kasus ketika tidak mungkin untuk mengirim bahan ke laboratorium segera, itu disimpan dalam lemari es pada suhu udara 4 ° C selama tidak lebih dari 48 jam;
  • saat mengangkut material, perlu hati-hati memantau integritas vial.

Sputum yang terkumpul dengan baik memiliki karakter lendir atau mukopurulen. Volume optimal dari sputum yang diteliti adalah 3-5 ml.

Dahak dikumpulkan di bawah pengawasan seorang profesional medis. Orang yang bertanggung jawab untuk mengumpulkan dahak, perlu untuk memantau penerapan aturan tertentu:

  • Perlu untuk menjelaskan kepada pasien tujuan penelitian dan kebutuhan untuk batuk tidak ludah atau nasofaring lendir, tetapi isi dari saluran pernapasan yang dalam. Ini dapat dicapai sebagai akibat dari batuk produktif yang terjadi setelah beberapa (2-3) napas dalam-dalam. Anda juga perlu memperingatkan pasien bahwa ia harus terlebih dahulu berkumur dengan air matang untuk menghilangkan bagian utama mikroflora vegetatif di rongga mulut dan sisa makanan yang menghambat studi dahak;
  • seorang pekerja medis yang berpartisipasi dalam pengumpulan dahak, selain jubah dan topi, harus mengenakan masker, sarung tangan karet dan celemek karet;
  • berdiri di belakang pasien, ia dianjurkan untuk menjaga botol sedekat mungkin ke bibir dan segera memisahkan dahak ke dalamnya karena batuk, sementara itu perlu untuk menyediakan bahwa aliran udara diarahkan jauh dari penyedia layanan kesehatan:
  • Setelah menyelesaikan koleksi dahak, profesional medis harus hati-hati menutup botol dengan tutup dan menilai kuantitas dan kualitas dahak yang dikumpulkan. Kemudian botol diberi label dan ditempatkan dalam bix khusus untuk diangkut ke laboratorium.

Jika pasien tidak mengeluarkan sputum, maka malam sebelum dan di pagi hari pada hari pengumpulan bahan harus diberikan ekspektoran: ekstrak obat Altea (mukaltin), bromhexin, ambroxol, dll - atau menerapkan inhalasi menghirup menggunakan peralatan yang dipasang di ruang koleksi sputum Bahan yang dikumpulkan dengan cara ini tidak dapat dilestarikan dan harus diperiksa pada hari pengumpulan. Untuk menghindari "penolakan" di laboratorium ke arahnya harus membuat tanda khusus.

Jika penelitian mikrobiologi tidak dilakukan di lembaga ini, bahan diagnostik yang dikumpulkan harus dikirim secara terpusat ke laboratorium, tunduk pada pelestarian bahan yang wajib antara pengiriman di lemari es atau dengan penggunaan pengawet. Kirim bahan ke laboratorium dalam kotak pengiriman yang mudah didesinfeksi. Setiap sampel harus diberi label dengan label yang sesuai, dan seluruh bets harus diisi dengan formulir yang menyertainya.

Mode dan frekuensi pemeriksaan pasien

Selama pemeriksaan awal, yang disebut diagnostik, pemeriksaan pasien untuk tuberkulosis, perlu untuk menyelidiki setidaknya 3 porsi dahak dalam 2 atau 3 hari. dikumpulkan di bawah pengawasan tenaga medis, yang meningkatkan efektivitas mikroskopi.

Skrining TB primer harus dilakukan oleh semua lembaga diagnostik medis dari sistem kesehatan. Baru-baru ini, untuk meningkatkan efektivitas pemeriksaan primer, atas dasar laboratorium diagnostik klinis, yang disebut pusat mikroskopi telah diorganisir, dilengkapi dengan mikroskop dan peralatan modern untuk memastikan keamanan epidemi.

Di fasilitas TB, jadwal skrining digunakan, yang melibatkan studi dahak atau bahan diagnostik lainnya setidaknya 3 kali dalam 3 hari. Dalam pengobatan, studi mikrobiologi dilakukan secara teratur, setidaknya sebulan sekali, dalam fase kemoterapi intensif. Selama transisi ke fase tindak lanjut, penelitian dilakukan lebih jarang - dengan interval 2–3 bulan, sementara keragaman penelitian berkurang menjadi dua.

Fitur dari koleksi bahan diagnostik di tuberkulosis ekstrapulmoner

Keunikan dari bahan patologis dalam bentuk tuberkulosis ekstrapulmoner adalah konsentrasi rendah mycobacterium tuberculosis di dalamnya, yang memerlukan metode penelitian mikrobiologi yang lebih sensitif, pertama-tama, metode penanaman pada medium nutrisi.

Pada tuberkulosis urogenital, urin adalah bahan penelitian yang paling mudah diakses. Pengambilan sampel urin harus dilakukan oleh perawat terlatih.

Alat kelamin eksternal dicuci dengan sabun dan air atau larutan potasium permanganat yang lemah. Hati-hati memproses pembukaan eksternal uretra. Bagian tengah urin pagi dikumpulkan dalam botol steril: pada pria - secara alami, pada wanita - dengan kateter. Urin dari pelvis ginjal dikumpulkan dalam tabung steril untuk kateterisasi satu atau dua ginjal, dalam kasus terakhir - selalu terpisah dari masing-masing ginjal. Sejumlah kecil urin ini disentrifugasi, endapan diperiksa.

Pada pria, air mani, belang-belang testis, sekresi prostat disentrifugasi untuk mendapatkan sedimen. Pada setiap lokalisasi dari proses spesifik di daerah genital pada pria, pijatan kelenjar prostat dapat berkontribusi pada sekresi tuberculosis mycobacterium yang mengandung sekresi.

Darah menstruasi dikumpulkan dari wanita dengan hisap atau menggunakan topi Kafka. Bahan yang dihasilkan dibebaskan dari sel darah merah, mencucinya dengan air suling, diikuti dengan sentrifugasi. Sedimen diselidiki.

Pengeluaran dari saluran servikal uterus dikumpulkan dalam wadah atau tutup Kafka, yaitu, diinginkan untuk mengakumulasi 1-2 ml bahan patologis.

Materi yang didapat saat operasi pada ginjal, alat kelamin. biopsi, kerokan dari endometrium, dihomogenisasi. Untuk melakukan ini, itu ditempatkan dalam mortar steril dan benar-benar dihancurkan dengan gunting steril. Pasir sungai steril ditambahkan ke suspensi yang dihasilkan dalam jumlah yang sama dengan massanya, kemudian 0,5-1,0 ml larutan natrium klorida isotonik ditambahkan dan keseluruhan tanah untuk membentuk massa pasty dengan penambahan larutan natrium klorida isotonik (4-5 ml). Kemudian massa dibiarkan menetap selama 1-1,5 menit, supernatan diperiksa.

Tuberkulosis tulang dan sendi. Punctate (nanah abses abscess), diperoleh dengan spuit steril, ditempatkan dalam wadah steril dan segera dikirim ke laboratorium. Pipet steril, pra-dibasahi dengan larutan natrium klorida isotonik steril, ambil 2-5 ml nanah, pindahkan ke botol dengan manik-manik dan tambahkan lagi 2-3 ml larutan natrium klorida isotonik. Botol ditutup dengan stopper dan dikocok dalam alat lelucon selama 8-10 menit. Bubur yang dihomogenisasi diperiksa.

Untuk bentuk tuberkulosis osteoartikular, nanah diambil dari fistula. Pembuangan berlebihan dikumpulkan langsung ke dalam tabung. Dalam kasus debit nanah sedikit, fistula dicuci dengan larutan isotonik steril natrium klorida, dan air pencuci dikumpulkan dalam tabung reaksi atau sepotong tampon yang direndam dalam nanah dikirim untuk diperiksa.

Bahan bedah yang diperoleh selama operasi pada tulang dan sendi, dapat terdiri dari massa purulen-nekrotik, granulasi, bekas luka, jaringan tulang, jaringan membran sinovial dan substrat lainnya. Ini diproses seperti pada tuberkulosis ginjal.

Pemeriksaan mikrobiologi cairan sinovial dalam larutan natrium sitrat 3% (rasio 1: 1) untuk mencegah pembekuan dilakukan langsung setelah tusukan.

Tuberkulosis kelenjar getah bening. Nanah yang diekstraksi selama tusukan kelenjar getah bening juga diperiksa. sebagai nanah usus abses. Jaringan kelenjar getah bening yang diperoleh selama operasi, biopsi, diperiksa seperti dalam bentuk tuberkulosis lainnya.

Studi tentang massa fecal untuk mycobacterium tuberculosis sangat jarang karena hampir tidak ada hasil positif.

Mikroskopi mikroskopi

Sputum microscopy adalah metode yang relatif cepat, sederhana dan murah yang harus digunakan dalam semua kasus dugaan tuberkulosis. Selain itu, penelitian ini dilakukan untuk menilai efektivitas kemoterapi dan untuk membangun pemulihan atau hasil pengobatan yang tidak berhasil tanpa adanya hasil kultur.

Gunakan 2 metode pemeriksaan mikroskopis:

  • metode mikroskopi langsung, ketika apusan dibuat langsung dari bahan diagnostik;
  • metode mikroskopi sedimen yang dibuat dari bahan dekontaminasi untuk kultur.

Metode pertama digunakan di laboratorium di mana hanya pemeriksaan mikroskopis dilakukan (laboratorium diagnostik klinis dari jaringan medis umum).

Hasil terbaik pemeriksaan mikroskopis diperoleh dengan memusatkan bahan diagnostik (misalnya, dengan sentrifugasi).

Untuk mendeteksi mycobacterium tuberculosis dengan kemungkinan 50% mikroskopi, 1 ml dahak harus mengandung lebih dari 5.000 sel mikroba. Dahak pasien dengan bentuk paru tuberkulosis biasanya mengandung sejumlah besar bakteri tahan asam, yang memungkinkan mereka untuk secara yakin mengidentifikasi mereka selama bakterioskopi. Sensitivitas diagnostik dari metode ini dapat ditingkatkan dengan memeriksa beberapa sampel dahak dari satu pasien. Bakterioskopi negatif tidak mengecualikan diagnosis tuberkulosis, karena beberapa dahak pasien mengandung lebih sedikit mikobakteri daripada yang dapat dideteksi dengan mikroskopi. Persiapan sputum yang buruk juga bisa menjadi penyebab pemeriksaan bakteriologis yang negatif.

Metode yang paling umum untuk mendeteksi mikobakteria cepat-asam dalam apusan adalah pewarnaan menurut Ziehl-Nelsen. Metode ini didasarkan pada penetrasi fuchsin karbol ke sel mikroba melalui membran, yang meliputi lapisan lipid lilin, dengan efek pemanasan simultan dan efek etsa kuat dari fenol. Perubahan warna dari apusan dengan larutan 25% asam sulfat atau 3% alkohol hidroklorik menyebabkan perubahan warna pada semua struktur yang tidak tahan asam. Elemen smear yang diputihkan diwarnai dengan larutan 0,3% metilen biru. Mycobacteria tidak melihat pewarna aniline biasa, sebagai akibat dari mikobakteri tahan asam dicat dengan warna raspberry-merah, dan mikroba dan elemen seluler lainnya - dengan warna biru.

Untuk memeriksa smear diwarnai dengan Zilu-Nelsen, mikroskop binokuler cahaya dengan tujuan imersi (90 atau 100 kali pembesaran) dan lensa mata dengan 7 atau 10 kali pembesaran digunakan. Periksa 100 bidang pandang, yang cukup untuk mengidentifikasi dalam mikobakteri BTA tunggal. Jika hasil penelitian tersebut negatif, disarankan untuk melihat 200 bidang pandangan lain untuk mengonfirmasi. Catat hasilnya, menunjukkan jumlah mycobacteria yang tahan asam yang terdeteksi (CUM).

Selain teknik ini, fluorochromes digunakan untuk mikroskopi fluorescent, yang memungkinkan untuk mencapai hasil terbaik. Penggunaan metode ini meningkatkan efisiensi mikroskopi sebesar 10-15%. Ketika merawat mycobacterium dengan luminescent dyes (auramine, rhodamine, dll.), Zat-zat ini juga terkait dengan struktur mirip lilin dari sel mikroba. Ketika sel dicat diradiasi dengan sumber cahaya yang menarik (spektrum radiasi ultraviolet tertentu), mereka mulai bersinar cahaya oranye atau merah terang dengan latar belakang hijau hitam atau gelap. Karena kecerahan dan kontras yang tinggi dari gambar yang terlihat, adalah mungkin untuk mengurangi pembesaran keseluruhan mikroskop dengan 4-10 kali, yang memperluas bidang pandang dan mengurangi waktu melihat persiapan. Seiring dengan ini, karena kedalaman bidang yang jauh lebih besar, adalah mungkin untuk meningkatkan kenyamanan penelitian.

Ketika menggunakan mikroskopi fluoresensi, dibutuhkan waktu yang jauh lebih sedikit untuk melihat daerah yang sama dari smear daripada dengan mikroskop cahaya dari smear bernoda dengan Tsil-Nelsen. Jika selama hari kerja seorang microscopist melihat melalui sekitar 20-25 noda tersebut, kemudian menggunakan mikroskopi fluoresensi, dia dapat memeriksa lebih dari 60-80 sampel dalam waktu yang sama. Ahli mikroskopis yang berpengalaman tahu bahwa pencelupan sel dengan campuran auramine dan rhodamine dalam beberapa cara khusus untuk mikobakteri tahan asam, yang dalam hal ini memiliki penampilan tongkat emas. Saprophytes berwarna kehijauan.

Keuntungan lain yang penting dari metode mikroskopi fluoresensi adalah kemampuan untuk mendeteksi mikobakteri yang dimodifikasi yang telah hilang di bawah pengaruh sejumlah faktor yang tidak menguntungkan, khususnya kemoterapi intensif, sifat ketahanan asam dan tidak terdeteksi dalam hubungan ini ketika diwarnai dengan Tsil-Nelsen.

Kerugian mikroskopi fluorescence termasuk biaya yang relatif tinggi dari mikroskop dan operasinya. Namun, di laboratorium besar atau terpusat, di mana beban melebihi tingkat 3 teknisi bekerja dengan tiga mikroskop konvensional, lebih murah untuk menggunakan mikroskop fluoresensi tunggal sebagai gantinya.

Metode Bakterioskopi memiliki spesifisitas yang agak tinggi (89-100%). Sekitar 97% dari hasil positif yang diperoleh dengan metode mikroskopi secara jelas dikonfirmasi oleh hasil pembenihan.

Perlu dicatat bahwa pemeriksaan mikroskopis dari apusan material patologis tidak dapat menentukan spesies mikobakteria yang resistan terhadap asam. Metode mikroskopi memungkinkan kita untuk menyimpulkan hanya tentang ada atau tidaknya mikroorganisme tahan asam dalam persiapan, yang dijelaskan oleh keberadaan di alam sejumlah besar tuberkulosis tuberculosis yang tahan asam mikro secara morfologis mirip dengan mycobacteria.

Evaluasi hasil mikroskopi yang diproduksi dalam satuan semi kuantitatif.

Agar dapat membandingkan hasil dari berbagai metode mikroskopi, koefisien empiris diperkenalkan. Sebagai contoh, untuk membandingkan hasil smear yang diwarnai dengan pewarna fluorescent dengan data mikroskop cahaya (pembesaran 1000x), perlu untuk membagi jumlah mikobakteria yang resistan terhadap asam yang dideteksi oleh mikroskop fluoresen oleh faktor yang sesuai pada pembesaran mikroskop berukuran 250x pada 10, dengan 450 kali lipat - jam 4, dengan 630 kali lipat - jam 2.

Fitur mikroskopi dalam tuberkulosis ekstrapulmoner

Mikroskopi langsung dilakukan, serta mikroskopi BTA yang disiapkan setelah pengayaan, diikuti oleh pewarnaan Zill-Nelsen atau luminescent dyes. Mikroskopi smear langsung tidak efektif karena konsentrasi mikobakteri yang rendah dalam materi, dan oleh karena itu lebih rasional untuk menggunakan metode pengayaan. Sentrifugasi paling efektif. Jika bahan biologis kental, sentrifugasi diterapkan dengan homogenisasi simultan dan pencairan material, yang dilakukan menggunakan sentrifugal kecepatan tinggi dengan gaya sentrifugal 3000 g dan larutan hipoklorit. Metode pengayaan lainnya, seperti mikroflotasi, saat ini tidak digunakan karena pembentukan aerosol yang berbahaya secara biologis.

Metode budaya untuk diagnosis tuberkulosis

Metode pembenihan, atau metode kultur, lebih sensitif daripada smear microscopy, dan memiliki beberapa kelebihan dibanding yang terakhir. Hal ini memungkinkan mendeteksi beberapa puluh mycobacteria yang layak dalam materi yang dipelajari dan memiliki nilai diagnostik yang besar. Hal ini sangat penting dalam studi bahan dari pasien yang baru didiagnosis atau diobati yang mengeluarkan sejumlah kecil mycobacteria.

Dibandingkan dengan mikroskopi, studi budaya dapat meningkatkan jumlah pasien tuberkulosis yang diidentifikasi lebih dari 15-25%, dan juga memverifikasi tuberkulosis pada tahap awal, ketika penyakit ini masih dapat diobati dengan baik. Keuntungan yang sangat penting dari penelitian budaya adalah kemungkinan mendapatkan budaya patogen, yang dapat diidentifikasi dan dipelajari dalam kaitannya dengan kepekaan obat, virulensi dan sifat biologis lainnya.

Kerugian metode budidaya termasuk durasi mereka (waktu tunggu untuk bahan mencapai 10 minggu). biaya lebih tinggi, kompleksitas pemrosesan bahan diagnostik.

Prinsip-prinsip pengobatan preservasi bahan diagnostik

Teknik mikrobiologi konvensional tidak dapat digunakan dalam penelitian tentang tuberkulosis. Ini karena faktanya. bahwa mycobacterium tuberculosis tumbuh sangat lambat, dan sebagian besar sampel bahan klinis mengandung mikroorganisme piogenik dan putrefactive yang tumbuh cepat, jamur. Pertumbuhan cepat mereka pada media nutrisi yang kaya menghambat perkembangan mikobakteria dan tidak memungkinkan untuk mengisolasi agen penyebab tuberkulosis, oleh karena itu, sebelum disemai, bahan diagnostik harus di pra-perawatan. Selain itu, mycobacteria yang dilepaskan dari saluran pernapasan pasien biasanya dikelilingi oleh sejumlah besar lendir, yang membuatnya sulit berkonsentrasi. Dalam hal ini, sebelum menabur sputum dan bahan sejenis lainnya, pencairan dan dekontaminasi mereka diperlukan.

Semua deterjen dan dekontaminan memiliki efek toksik yang lebih nyata pada mikobakteria. Sebagai hasil dari perawatan, hingga 90% dari mycobacteria dapat mati. Untuk melestarikan bagian yang cukup dari populasi mikobakteri, perlu menggunakan metode pengolahan lembut yang memungkinkan, di satu sisi, untuk menekan mikroorganisme piogenik dan reaktif yang tumbuh cepat, dan di sisi lain, untuk mempertahankan kelangsungan hidup mikobakteri yang ada dalam bahan.

Tergantung pada bahan, tingkat homogenitas dan kontaminasi, dekontaminan yang berbeda digunakan untuk pengobatan preservasi: untuk larutan dahak - natrium hidroksida 4%, larutan natrium fosfat 10% tersubstitusi 10%, benzalkonium klorida trisodium fosfat, NALC-NaOH (N-asetil-L-sistein- natrium hidroksida) dengan konsentrasi NaOH akhir 1%, untuk urin dan bahan cair lainnya - larutan asam sulfat 3%, untuk sampel terkontaminasi, bahan yang mengandung lemak - larutan asam oksalat hingga 5%. Selain itu, dalam beberapa kasus, gunakan enzim, surfaktan (deterjen). Penggunaan tween dan beberapa deterjen lain disertai dengan lebih sedikit kematian sel mikobakteri (40-50% bertahan hidup). Namun, mereka hanya dapat digunakan untuk bahan cair. Yang paling luas di dunia menerima NALC-NaOH. dirilis dalam set. Metode ini memungkinkan untuk mengisolasi lebih dari 85% dari populasi sel mikobakteri. Dekontaminasi bahan padat yang mengandung jaringan lebih sulit, karena sulit untuk menebak tingkat dispersi bahan dalam proses homogenisasi. Misalnya, pemrosesan spesimen biopsi kelenjar getah bening sering disertai dengan peningkatan frekuensi kontaminasi dengan flora asing. Dalam hal ini, 1% etonium dapat digunakan.

Bahan non-homogen dihomogenkan menggunakan manik-manik kaca dengan adanya dekontaminan. Bahan cair pra-sentrifugasi dan hanya sedimen yang diproses.

Teknik menabur dan inkubasi

Setelah pretreatment, bahan tersebut disentrifugasi, karena mikobakteria yang diendapkan dan konten mereka dalam sedimen meningkat ("pengayaan sedimen"). Endapan yang dihasilkan menjadi sasaran netralisasi dan disemaikan dengan itu (diinokulasi) permukaan media nutrisi padat atau tabung reaksi dengan media cair (semi-cair). Dari bagian sisa endapan, apusan disiapkan untuk pemeriksaan mikroskopis. Teknik penyemaian harus mencegah kontaminasi silang dari bahan diagnostik.

Untuk interpretasi klinis yang dapat diandalkan dari hasil penelitian mikrobiologi, perlu untuk mengamati aturan berikut: studi mikroskopis dan budaya harus dilakukan secara paralel dari sampel yang sama dari bahan diagnostik.

Tabung diinokulasi ditempatkan dalam termostat pada 37 o C selama 2 hari dalam posisi horizontal. Ini memberikan serapan yang lebih seragam dari bahan ke dalam medium nutrisi. Setelah 2 hari, tabung dipindahkan ke posisi vertikal dan tertutup rapat dengan sumbat karet atau silikon untuk mencegah media yang diunggulkan mengering.

Tanaman disimpan dalam termostat pada 37 o C selama 10-12 minggu dengan tampilan mingguan reguler. Dengan setiap tampilan tes, parameter berikut dicatat:

  • Istilah visual diamati dari tanggal pertumbuhan tanam;
  • tingkat pertumbuhan (jumlah CFU);
  • kontaminasi penanaman dengan flora atau jamur mikroba asing (tabung seperti itu dihapus);
  • tidak ada pertumbuhan yang terlihat. Tabung dibiarkan dalam termostat hingga tampilan berikutnya.

Media nutrisi

Untuk budidaya mycobacteria menggunakan media nutrisi yang berbeda; padat, semi cair, cair. Namun, tidak satu pun dari media nutrisi yang diketahui memiliki sifat yang memastikan pertumbuhan semua sel mikobakteri. Dalam hal ini, untuk meningkatkan kinerja, dianjurkan untuk menggunakan secara bersamaan 2-3 media nutrisi dari komposisi yang berbeda.

Sebagai media standar untuk isolasi utama agen penyebab tuberkulosis dan penentuan kepekaan obat, WHO merekomendasikan media Lowenstein-Jensen. Ini adalah media telur padat di mana pertumbuhan mycobacteria diperoleh pada hari ke 20-25 setelah pembenihan bahan positif bakteriososcopically. Tanaman bahan negatif bakteriologis membutuhkan periode inkubasi yang lebih lama (hingga 10-12 minggu).

Di negara kita, distribusi yang diusulkan oleh E.R. Finn Egg Medium Finn II. Ini berbeda dalam hal itu daripada L-asparagine menggunakan monosodium glutamate, yang memicu cara lain untuk sintesis asam amino mycobacteria. Pertumbuhan muncul pada media ini sedikit lebih awal, dan frekuensi sekresi mikobakteri adalah 6-8% lebih tinggi daripada pada Levenshtein - Jensen sedang.

Untuk meningkatkan efisiensi diagnosis bakteriologi tuberkulosis ekstrapulmoner, disarankan untuk memasukkan media modifikasi Finn-II di kompleks media nutrisi. Untuk mempercepat pertumbuhan, sodium thioglycolate (0,05%) ditambahkan ke medium nutrisi Finn-II, yang mengurangi konsentrasi oksigen. Untuk melindungi sistem enzim mikobakteri dari produk beracun peroksidasi lipid, antioksidan α-tokoferol asetat dimasukkan ke dalam medium nutrisi Finn-II pada konsentrasi 0,001 µg / ml. Menaburi bahan diagnostik yang dihasilkan dengan metode standar.

Di laboratorium TB Rusia, modifikasi lain dari media nutrisi padat juga digunakan; diusulkan oleh G.G. Nutrisi Mordovian sedang "Baru", dikembangkan oleh V.A. Anikin medium nutrisi A-6 dan A-9, dll.

Karena kenyataan bahwa selama kemoterapi, berbagai sistem metabolisme sel mikroba rusak, bagian dari populasi mikobakterium kehilangan kemampuannya untuk berkembang secara normal pada media nutrisi biasa dan membutuhkan media nutrisi yang seimbang (semi cair atau cair) osmotik.

Evaluasi dan catatan hasil penebaran bahan diagnostik

Beberapa strain dan jenis mikobakteria tumbuh lambat, pertumbuhan dapat muncul bahkan pada hari ke-90. Jumlah tanaman semacam itu kecil, tetapi membuat mereka tahan terhadap tanaman dalam termostat selama 2,5-3 bulan.

Budaya virulen dari mycobacterium tuberculosis biasanya tumbuh di media telur padat dalam bentuk R-bentuk koloni dengan berbagai ukuran dan spesies. Koloni kering, keriput, gading, sedikit berpigmen. Di lingkungan lain, koloni Mycobacterium tuberculosis mungkin lebih lembab. Setelah menjalani kemoterapi atau dalam pengobatan, koloni yang halus dengan pertumbuhan basah (bentuk-S) dapat dilepaskan.

Ketika mengisolasi tanaman, satu set studi khusus digunakan untuk membedakan mycobacterium tuberculosis dari mycobacteria non-tuberculous dan saprophytes tahan asam.

Jawaban positif diberikan setelah pemeriksaan mikroskopis wajib untuk noda bernoda dengan Zil-Nelsen dari koloni yang tumbuh. Dalam kasus pertumbuhan mycobacteria di smear, batang merah terang ditemukan, berbaring sendiri atau dalam kelompok, membentuk kelompok dalam bentuk kepangan atau kepangan. Dalam budaya muda, terutama mereka yang diisolasi dari pasien yang diobati dengan kemoterapi untuk waktu yang lama, mikobakteri ditandai dengan polimorfisme yang jelas, sampai dengan kehadiran varian pendek, hampir coccoid atau memanjang, mirip dengan miselium jamur, bersama dengan bentuk-bentuk berbentuk batang.

Tingkat pertumbuhan mycobacteria ditunjukkan oleh skema berikut: (+) - 1-20 CFU dalam tabung reaksi (ekskresi bakteri kurang); (++) - 20-100 CFU in vitro (ekskresi bakteri sedang); (+++) -> 100 CFU in vitro (ekskresi bakteri yang melimpah). Dalam diagnosa laboratorium tuberkulosis, itu tidak cukup untuk memberikan jawaban, apakah atau tidak mycobacterium terdeteksi oleh metode ini atau itu. memiliki pemahaman rinci tentang volume dan sifat populasi mikobakteri, komposisi dan sifatnya. Ini adalah data yang memungkinkan untuk secara benar menafsirkan keadaan proses, merencanakan taktik dan segera memperbaiki perawatan.

Dalam beberapa tahun terakhir, untuk mempercepat pertumbuhan mycobacteria, media nutrisi pada basis agar dengan berbagai suplemen pertumbuhan dan penggunaan campuran gas khusus telah diusulkan. Untuk mendapatkan pertumbuhan mycobacteria pada lingkungan ini selama budidaya menciptakan suasana dengan kandungan karbon dioksida yang tinggi (4-7%). Untuk tujuan ini, gunakan khusus DENGAN2-inkubator. Namun, sistem otomatis yang paling dikembangkan untuk budidaya mycobacteria: MGIT-BACTEC-960 dan MB / Bact.

Salah satu sistem tersebut adalah sistem MGIT (tabung yang menunjukkan pertumbuhan mikobakteri), yang termasuk pengembangan teknologi tinggi dan dirancang untuk mempercepat diagnosis bakteriologis tuberkulosis dan menentukan sensitivitas mikobakteria terhadap obat lini pertama dan beberapa obat lini kedua. MGIT difokuskan untuk menggunakannya sebagai bagian dari perangkat VASTES-960. Mikroorganisme dibudidayakan dalam tabung khusus dengan medium nutrisi cair atas dasar medium Middlebrook-7H9 yang dimodifikasi. Untuk merangsang pertumbuhan mycobacteria dan menghambat pertumbuhan mikroflora asing, suplemen pertumbuhan Suplemen MGIT dan campuran obat antibakteri PANTA digunakan.

Registrasi pertumbuhan mikroorganisme dilakukan secara optikal. Hal ini didasarkan pada fluoresensi yang timbul dari konsumsi oksigen oleh mycobacteria dalam proses pertumbuhan. Zat fluorochrome yang tergantung oksigen terkandung di bagian bawah tabung uji khusus dan dilapisi dengan lapisan silikon. Reproduksi mycobacteria menyebabkan penurunan jumlah oksigen dalam tabung dan penurunan konsentrasinya, yang menyebabkan peningkatan fluorescence, yang menjadi terlihat ketika tabung disinari dengan sinar ultraviolet dan secara otomatis terdeteksi oleh sensor foto yang dibangun ke dalam perangkat VASTES-960. Intensitas cahaya yang tercatat dalam unit pertumbuhan (unit pertumbuhan GU). Data pertumbuhan dimasukkan ke komputer di mana ia dapat disimpan secara otomatis. Analisis komputer kurva pertumbuhan dapat memberikan informasi tentang keberadaan berbagai kolam mikobakteri, termasuk yang tidak tuberkulosis, dan juga membantu untuk menilai sifat pertumbuhan mycobacteria.

Sebagai hasil dari pengenalan sistem tersebut, waktu munculnya pertumbuhan mycobacteria berkurang secara signifikan, rata-rata 11 hari pada WASTES-960 dan 19 hari pada MB / Bact versus 33 hari pada medium nutrisi padat standar. Perlu dicatat bahwa sistem ini membutuhkan personel berkualifikasi tinggi. Menabur bahan pada media cair harus disertai dengan menabur di Levenshteyn-Jensen menengah, yang memainkan peran stand-in dalam kasus di mana tuberkulosis tidak menimbulkan pertumbuhan pada media lain.

Penentuan sensitivitas obat mikobakterium

Menentukan spektrum dan tingkat kepekaan mikobakteria terhadap obat anti-tuberkulosis adalah kepentingan klinis, serta untuk penilaian epidemiologi penyebaran TB yang resistan terhadap obat. Selain itu, pemantauan resistensi obat memungkinkan untuk mengevaluasi efektivitas program anti-TB secara keseluruhan, menjadi indikator integral dari kerja semua komponen kegiatan anti-tuberkulosis.

Keragaman dan waktu kepekaan obat:

  • sebelum dimulainya perawatan sekali untuk menentukan strategi dan taktik pengobatan:
  • ketika mengisolasi dari kultur pasien dari berbagai bahan (dahak, BAL, urin, eksudat, cairan serebrospinal, dll), semua strain terisolasi diperiksa:
  • pada akhir fase intensif pengobatan tanpa adanya dinamika klinis dan radiologi:
  • jika perlu, ubah rejimen pengobatan dalam kasus:
    • kurangnya negativitas dahak;
    • kultur ulang setelah negativitas dahak;
    • peningkatan tajam dalam jumlah KUM dalam apusan setelah penurunan awal. Telah diketahui bahwa strain Mycobacterium tuberculosis yang heterogen dalam hal kepekaan obat diisolasi dari bahan dari pasien dengan tuberkulosis. Sensitivitas strain terhadap obat anti-tuberkulosis mungkin berbeda dalam kisaran obat, derajat, frekuensi dan tingkat resistensi.

Tingkat resistensi obat Mycobacterium tuberculosis ditentukan sesuai dengan kriteria yang ditetapkan, yang difokuskan pada signifikansi klinis resistensi dan tergantung pada aktivitas anti-tuberkulosis obat, farmakokinetik, dan konsentrasi dalam lesi. dosis terapi maksimum dan sebagainya.

Penentuan sensitivitas obat mikobakteri saat ini dilakukan dengan metode mikrobiologi:

  • konsentrasi absolut (metode pengenceran pada media nutrisi padat atau cair),
  • proporsi
  • koefisien resistansi.

Perlawanan biasanya memanifestasikan dirinya dalam bentuk pertumbuhan koloni Mycobacterium tuberculosis yang diamati secara visual, namun, ada teknik yang menginduksi pertumbuhan pada tahap awal pembagian sel Mycobacterium dalam bentuk reaksi warna. Metode ini mengurangi waktu tes dari 3-4 hingga 2 minggu.

Metode konsentrasi absolut yang direkomendasikan oleh Komite Kemoterapi WHO, yang secara metodologis paling sederhana, tetapi memerlukan standarisasi dan akurasi prosedur laboratorium yang tinggi, telah menyebar luas di Rusia. Tes kerentanan obat terdiri dari satu set tabung dengan medium nutrisi yang dimodifikasi dengan obat anti-tuberkulosis. Kit terdiri dari 2-3 tabung dengan konsentrasi yang berbeda dari masing-masing obat yang digunakan, satu tabung kontrol dengan media tanpa obat dan satu tabung yang mengandung 1000 μg / ml natrium salisilat atau 500 μg / ml para-nitrobenzoic acid untuk mendeteksi pertumbuhan mikobakteri non-tuberkulosis.

Untuk persiapan satu set media dengan obat-obatan menggunakan media modifikasi Lowenstein-Jensen (tanpa pati), yang dituangkan ke dalam botol. Di masing-masing labu, tambahkan sejumlah tertentu pengenceran obat anti-TB yang tepat. Isi botol sepenuhnya dicampur, dituangkan ke dalam tabung reaksi dan digulingkan dalam posisi miring selama 40 menit pada suhu 85 ° C. Disarankan untuk mengoagulasi media dalam obeng listrik dengan kontrol suhu otomatis. Sedang dengan obat anti-tuberkulosis

Baris pertama dapat disimpan dalam lemari es pada 2-4 ° C selama 1 bulan, dengan obat baris kedua - tidak lebih dari 2 minggu. Media penyimpanan dengan obat pada suhu kamar tidak dapat diterima. Ketika menyiapkan solusi obat anti-tuberkulosis, aktivitas mereka diperhitungkan, menghitung konsentrasi, disesuaikan dengan berat molekul bagian nonspesifik dari obat, kemurnian, dll. Untuk menentukan kepekaan obat hanya menggunakan zat kimia murni.

Prinsip metode ini terdiri dalam menentukan konsentrasi obat anti-tuberkulosis, menghambat pertumbuhan bagian signifikan dari populasi mikobakteri. Ketika dilakukan dengan benar, metode ini memiliki akurasi yang baik.

Sebelum pengujian, perlu untuk memastikan bahwa budaya yang dipilih Mycobacterium tuberculosis tidak memiliki mikroflora asing. Dari budaya mycobacteria dalam larutan natrium klorida 0,9%, suspensi homogen disiapkan mengandung 500 juta sel mikroba dalam 1 ml (standar kekeruhan optik dari 5 unit). Suspensi yang dihasilkan diencerkan dengan 0,9% larutan natrium klorida (1:10) dan 0,2 ml suspensi ditambahkan ke setiap tabung dari satu set media kultur. Tabung yang ditanam ditempatkan dalam termostat pada 37 ° C dan disimpan dalam posisi horizontal selama 2-3 hari sehingga permukaan miring dari media nutrisi secara seragam diinokulasi dengan suspensi mycobacterium tuberculosis. Kemudian tabung dipindahkan ke posisi vertikal dan diinkubasi selama 3-4 minggu. Pengukuran hasil dilakukan dalam 3-4 minggu.

Karena waktu isolasi patogen dari bahan klinis pada media nutrisi setidaknya 1-1,5 bulan, hasil penentuan kepekaan obat dengan metode ini dapat diperoleh tidak lebih awal dari 2-2,5 bulan setelah penyemaian materi. Ini adalah salah satu kelemahan utama metode ini.

Menafsirkan hasil penentuan kepekaan obat mikobakteri berdasarkan kriteria tertentu. Pada media padat, suatu budaya dianggap peka terhadap konsentrasi obat yang terkandung dalam medium jika jumlah koloni mikobakteria tumbuh pada tabung ini dengan obat tidak melebihi 20 dengan pertumbuhan melimpah pada tabung kontrol tanpa obat. Hanya di hadapan lebih dari 20 koloni, budaya ini dianggap tahan terhadap konsentrasi ini. Dalam prakteknya, ketika menerima hasil pertumbuhan dalam tabung tes, dekat dengan 20 CFU. perlu untuk memberitahukan unit klinis bahwa sensitivitas atau stabilitas dalam kasus ini adalah sifat batas, karena kadang-kadang ini dapat menjelaskan dinamika yang samar dari indikator klinis.

Untuk berbagai obat, konsentrasi tertentu telah ditetapkan di mana perkalian populasi mikobakteri kritis diamati. Konsentrasi ini disebut "kritis". Sebagai kriteria stabilitas, besarnya pertumbuhan populasi mikobakteri pada medium nutrisi dengan obat dalam konsentrasi kritis digunakan.

Dalam praktek phthisiological domestik dalam menentukan resistensi obat tidak terbatas hanya untuk menentukan konsentrasi kritis. Ini karena faktanya. bahwa penentuan tingkat resistensi obat patogen memungkinkan dokter untuk lebih tepat membentuk taktik kemoterapi menggunakan pengetahuan tentang efek potensiasi kombinasi obat, untuk mengantisipasi resistansi silang, atau untuk menerapkan obat yang lebih efektif dari kelompok obat anti-tuberkulosis yang digunakan.

Metode konsentrasi absolut adalah yang paling sederhana, namun, dan yang paling sensitif terhadap kesalahan dalam implementasinya. Lebih dapat diandalkan, terutama ketika menentukan kepekaan terhadap obat lini kedua, dan metode proporsi umum di luar Rusia. Ini memperhitungkan kekurangan dari metode konsentrasi absolut, tetapi lebih memakan waktu untuk melakukan.

Metode ini sangat mirip dengan metode konsentrasi absolut. Persiapan tabung reaksi dengan obat yang diproduksi dengan cara yang sama. seperti dengan metode konsentrasi absolut. Namun, dosis penaburan suspensi Mycobacterium tuberculosis berkurang 10 kali. bahwa tingkat frekuensi resistensi spontan dari beberapa strain Mycobacterium tuberculosis terhadap obat-obatan seperti etambutol, protionamide, capreomycin. Sebagai kontrol, gunakan 2 atau 3 tabung dengan dosis benih yang sama dengan tabung reaksi, diencerkan secara seri 10 dan 100 kali. Kriteria resistensi adalah proporsi pertumbuhan T Mycobacterium tuberculosis yang diamati secara visual. Untuk obat-obatan dari baris 1, kriteria keberlanjutan adalah kelebihan pertumbuhan 1% dari populasi awal, untuk obat dari baris ke-2 - pertumbuhan 1 atau lebih dari 10% dari baseline, tergantung pada konsentrasi kritis yang dipilih.

Pada tahun 1997, kelompok kerja WHO dan Uni Anti-Tuberkulosis Internasional untuk mendeteksi resistensi obat anti-tuberkulosis membuat penyesuaian untuk kriteria ini, menunjukkan bahwa mycobacteria tumbuh pada media telur padat Levenshteyn-Jensen harus dianggap stabil di

  • dihidrostreptomisin - 4 µg / ml;
  • isoniazid - 0,2 µg / ml:
  • rifampicin - 40 µg / ml:
  • Ethambutol - 2 µg / ml.

Pada tahun 2001, konsentrasi penting diusulkan untuk obat lini kedua berikut (untuk proporsi kritis 1%):

  • capreomycin - 40 µg / ml;
  • protionamide - 40 µg / ml;
  • kanamisin - 30 µg / ml;
  • viomycin - 30 µg / ml;
  • sikloserin - 40 µg / ml;
  • asam aminosalicylic - 0,5 µg / ml;
  • Ofloxacin - 2 µg / ml.

Hasil pertumbuhan dinilai setelah 4 minggu sebagai awal dan setelah 6 minggu kultivasi sebagai akhir.

Untuk menentukan kepekaan obat terhadap pirazinamid, yang secara luas digunakan dalam kemoterapi modern tuberkulosis, konsentrasi kritis yang disarankan adalah 200 µg / ml. Namun, masih belum ada metode yang diterima secara umum untuk menentukan resistansi obat terhadap obat ini pada media nutrisi padat, karena aktivitas antibakterinya dimanifestasikan hanya dalam medium asam (pH o C;

  • kurangnya pembentukan pigmen (warna gading);
  • diucapkan warna tahan asam;
  • adonan niacin yang positif;
  • tes nitrat reduktase positif;
  • tidak adanya katalase termostabil (68 o C).
  • kurangnya pertumbuhan pada lingkungan Levenshteyn-Jensen, mengandung:
    • 1000 μg / ml natrium salisilat,
    • 500 μg / ml asam paranitrobenzoic,
    • 5% natrium klorida:
  • pertumbuhan di hadapan 1-5 μg / ml asam thiophene-2-karboksilat.
  • Relevansi diferensiasi mikobakteri terisolasi akan meningkat nyata dengan peningkatan frekuensi pendaftaran kasus HIV / AIDS yang terkait dengan tuberkulosis atau mikobakteriosis. Saat ini, tidak ada kepastian mutlak bahwa laboratorium regional praktis siap untuk melaksanakan jumlah pekerjaan ini dengan benar.

    Diagnosis imunologi tuberkulosis

    Ada sejumlah fenomena universal, obat-obatan, dan tes imunologi yang awalnya ditemukan selama tuberkulosis atau pada model respon imun terhadap mycobacteria. Ini termasuk BCG dan tuberkulin, sebuah fenomena seperti HRT kutan (tes tuberkulin - reaksi Pirke dan Mantoux), reaksi terhadap pemberian tuberkulin subkutan pada hewan yang peka (fenomena Koch). Beberapa antibodi pertama dalam penyakit menular juga ditemukan di tuberkulosis. Tentu saja, semakin dalam pemahaman tentang mekanisme kekebalan anti-tuberkulosis dan kontrol genetik mereka, semakin luas dapat digunakan metode imunologi dan obat-obatan yang mempengaruhi sistem kekebalan tubuh untuk memecahkan masalah praktis dari phthisiology.

    Masalah praktis yang paling penting dan sulit saat ini dianggap sebagai pendeteksian tuberkulosis dalam proses skrining massal populasi. Namun, meskipun banyak laporan tentang "keberhasilan" (pada materi terbatas), tidak ada metode imunologi yang cocok (direproduksi di "tangan apa pun") dan persiapan untuk tujuan ini.

    Metode imunologi, khususnya, studi serologis (definisi antigen, antibodi) dan tes provokasi tuberkulin, sangat banyak digunakan dalam praktik klinis.

    Di tempat pertama di antara studi imunologi yang digunakan dalam diagnosis diferensial, adalah metode serologis - definisi antigen dan antibodi di berbagai media tubuh.

    Kekhususan penentuan antibodi terhadap mycobacterium tuberculosis tergantung pada antigen yang digunakan dalam analisis kekebalan. Sejumlah besar antigen telah diusulkan, yang pertama adalah tuberkulin PPD:

    • PPD dan persiapan kompleks lainnya dari cairan kultur;
    • disintegrat ultrasonik;
    • Ekstrak triton dan preparat kompleks lainnya dari dinding sel;
    • 5 antigen (Daniel);
    • 60 antigen (Coccito);
    • lipoarabinomannan;
    • faktor tali pusat (trehalose-6,6-di-micolate);
    • fenolik dan glikolipid lainnya;
    • lipopolisakarida;
    • antigen pengikat fibronektin;
    • protein (paling sering rekombinan); 81,65,38,34,30,19,18,16,15,12 KDA dan lainnya.

    Sebagai hasil dari penelitian bertahun-tahun oleh para ilmuwan Rusia dan asing, pola utama produksi antibodi dan efektivitas diagnosis serologi tuberkulosis terungkap: semakin kompleks antigen, semakin tinggi sensitivitas dan menurunkan spesifisitas tes. Kekhususan di negara yang berbeda bervariasi tergantung pada infeksi populasi M. tuberculosis dan mycobacteria non-TB, pada vaksinasi BCG, dll. Pada anak-anak, informativitas serodiagnosis lebih rendah daripada pada orang dewasa. Pada tuberkulosis primer (seringkali anak-anak) definisi IgM lebih informatif. dengan sekunder - IgG. Dalam informasi serodiagnostik yang terinfeksi HIV, penentuan antibodi menurun. Efektivitas penentuan antibodi tergantung pada sejumlah "momen klinis": aktivitas proses (ada atau tidak adanya "isolasi" dari mycobacteria, keberadaan rongga, tingkat infiltrasi), sejauh mana proses, durasi perjalanannya.

    Sensitivitas metode enzim immunoassay (ELISA) sekitar 70%. Kurangnya efektivitas penelitian adalah karena spesifitasnya yang rendah. Sebelumnya, kemungkinan menggunakan skrining serologis pada kelompok berisiko tinggi, khususnya di antara orang-orang dengan perubahan pasca-tuberkulosis di paru-paru, dianggap.

    Untuk meningkatkan spesifisitas ELISA, pencarian untuk antigen yang lebih spesifik, termasuk yang diperoleh dengan rekayasa genetika, berlanjut: ESAT-6 dan lainnya (lihat di atas). Penggunaan antigen spesifik ketat (38 kDa, ESAT) meningkatkan spesifisitas. tetapi secara signifikan mengurangi sensitivitas analisis. Bersama dengan ELISA (sistem uji laboratorium eksperimental, misalnya, kit ELISA Pathozyme), kit imunokromatografi dengan penyaringan lateral (Mycodot), serta tes serupa lainnya (dot-analisis pada membran) dengan penilaian visual dari hasil penelitian, telah diajukan. Saat melakukan tes ini, analisis berlangsung dalam 10-30 menit; mereka tidak memerlukan peralatan khusus, memerlukan penilaian visual dari hasil, yang terkait dengan subyektivitas yang dikenal. Metode-metode ini memiliki kira-kira karakteristik sensitivitas dan spesifisitas yang sama (masing-masing 70% dan 90-93%) sebagai ELISA tradisional.

    Penggunaan metode analisis kekebalan memiliki nilai tertentu sebagai tambahan yang diperhitungkan dalam kompleks metode yang digunakan, dalam diagnosis banding tuberkulosis, terutama dalam diagnosis bentuk ekstrapulmonernya. ELISA paling efektif dalam mendiagnosis meningitis TB dalam studi cairan serebrospinal. Dalam hal ini, sensitivitas analisis adalah 80-85%, dan spesifisitasnya adalah 97-98%. Ada bukti efektivitas penentuan antibodi terhadap mycobacterium tuberculosis pada cairan air mata dalam diagnosis uveitis tuberkulosis.

    Induksi sintesis gamma-interferon in vitro

    Gamma-interferon (IFN-γ) adalah faktor pertahanan kekebalan spesifik yang diwujudkan melalui aktivasi sistem enzim makrofag. Induksi sintesis IFN-γ oleh limfosit T peka menyebabkan interaksi mereka dengan antigen mikobakteri.

    Sebagai antigen digunakan sebagai tuberkulin PPD. dan antigen spesifik yang diperoleh dengan rekayasa genetika, khususnya antigen ESAT-6 (antigen yang disekresi awal dengan massa molekul 6 kDa) dan CFP-10 (filtrat kultur protein, 10 kDa). Rekayasa genetika atau antigen rekombinan tidak ada dalam sel vaksin BCG dan mikobakteria lainnya. Ketika menggunakan tuberkulin, hasil tes induksi IFN-are sebanding dengan hasil tes kulit tuberkulin (korelasi langsung). Ketika menggunakan antigen yang direkayasa secara genetik, hasil tes lebih spesifik dan tidak tergantung pada vaksinasi BCG sebelumnya. Ketika memeriksa individu yang divaksinasi yang tidak memiliki kontak dengan infeksi tuberkulosis, spesifisitas tes adalah 99%. Sensitivitas tes di antara pasien dengan tuberkulosis berkisar 81-89%.

    Tes dan tes diagnostik berdasarkan budidaya jangka pendek sel darah utuh atau sel mononuklear yang diisolasi dari darah dengan in vitro Mycobacterium tuberculosis antigen dengan penentuan konsentrasi IFN-γ berikutnya atau perhitungan jumlah T-limfosit yang mensintesis IFN-γ telah dikembangkan. Konsentrasi interferon disintesis in vitro, ditentukan oleh ELISA menggunakan antibodi monoklonal yang mengikat IFN-γ. Kemudian, menggunakan standar kalibrasi IFN-γ menentukan konsentrasinya dalam tabung reaksi atau sumur tablet.

    Ketika melakukan tes Elispot, jumlah T-limfosit mensintesis IFN-γ. dihitung di permukaan Piala, ditutupi dengan antibodi untuk IFN-γ.

    pengembang diagnosticum berdasarkan induksi IFN-γ in vitro, yang disetujui oleh Badan Obat dan Produk AS, berpendapat bahwa menggunakan tes tidak mungkin untuk membedakan infeksi tuberkulosis laten dari tuberkulosis aktif. Oleh karena itu, di daerah dengan tingkat infeksi tinggi, tes tidak memiliki nilai diagnostik langsung. Namun, di negara kami dapat digunakan untuk membedakan infeksi tuberkulosis pada anak-anak dari alergi pasca-vaksinasi, serta untuk menilai tingkat kekebalan spesifik dalam proses pengobatan.

    Saat ini, sistem uji domestik untuk menentukan induksi sintesis IFN-γ oleh antigen spesifik tuberkulosis in vitro sedang dipelajari.

    Status kekebalan dan perjalanan tuberkulosis, imunokoreksi

    Dalam proses mengobati tuberkulosis pada manusia, ada perubahan antigenemia dan keadaan sistem kekebalan tubuh.

    Data tentang perubahan eksudat dan jaringan sangat kontradiktif. Satu-satunya hal yang dapat dicatat dengan alasan yang baik adalah bahwa sejumlah besar limfosit T yang diaktifkan biasanya ditemukan pada granuloma tuberkular.

    Masuk akal untuk memikirkan dua poin lagi yang diperlukan untuk memahami peran mekanisme imunologi dalam pengobatan tuberkulosis pada manusia:

    • Pasien AIDS memiliki insidensi resistensi multi-obat yang sangat tinggi;
    • dalam kasus resistensi multiobat (dan tanpa adanya infeksi HIV), gangguan kekebalan (terutama hubungan sel-T) sangat signifikan.

    Dalam tuberkulosis, berbagai metode imunokoreksi digunakan secara luas: ini terutama obat-obatan yang bertindak terutama pada kekebalan sel-T dan sistem fagosit mononuklear (hormon thymus, isofon, licopid, polyoxidonium, dll.). serta seluruh mycobacteria (yang dilemahkan) dan komponen-komponennya.

    Diagnosis Biologis Molekuler Tuberkulosis

    Metode biologi molekuler dalam diagnosis penyakit infeksi terutama meliputi metode yang didasarkan pada manipulasi bakteri dan virus patogen dengan bahan genomik untuk mengidentifikasi bahan genetik spesifik - segmen DNA dengan urutan nukleotida khusus untuk spesies atau strain patogen ini, untuk menganalisis spesifik Urutan DNA dalam gen yang menentukan kepekaan patogen terhadap zat obat tertentu, serta untuk menganalisis fungsi aktivitas flax dari gen patogen tertentu. Metode biologi molekuler banyak digunakan dalam penelitian ilmiah dan aplikasi praktis dalam diagnosis dan pengendalian berbagai infeksi bakteri dan virus setelah penemuan pada tahun 1985 dari Kerry Mulllis (pemenang Hadiah Nobel 1989) dari reaksi berantai polymerase.

    Prinsip dan kemungkinan metode reaksi berantai polimerase

    PCR memungkinkan Anda untuk memperkuat (mengalikan) secara in vitro urutan nukleotida (fragmen DNA patogen) selama beberapa jam jutaan kali. Melakukan reaksi di hadapan untaian tunggal DNA menentukan sensitivitas yang sangat tinggi dari analisis.

    Urutan nukleotida dari bagian-bagian tertentu dalam rantai DNA menentukan identitas genetik mikroorganisme, yang menjelaskan spesifitas tinggi PCR.

    Nilai dari metode ini untuk mendeteksi dan mempelajari karakteristik Mycobacterium tuberculosis adalah karena karakteristik biologis dari mikroorganisme dengan pertumbuhan yang sangat lambat: waktu penggandaan DNA Mycobacterium tuberculosis selama kultivasi mereka adalah 12-24 jam.

    Prinsip metode PCR adalah amplifikasi - banyak, jutaan kali. perkalian bagian dari urutan DNA tertentu dalam tabung reaksi microvolume dengan pengulangan siklik dari tiga tahap berikut dari reaksi, masing-masing berlangsung dalam rezim temperatur yang berbeda:

    • Tahap I - denaturasi DNA beruntai ganda ketika dipanaskan dengan divergensi rantai;
    • Tahap II - pengikatan komplementer (hibridisasi) dari primer (primer oligonukleotida) dengan bagian akhir dari rantai khusus yang dipilih untuk perbanyakan fragmen DNA;
    • Tahap III - penyelesaian rantai fragmen DNA menggunakan polimerase DNA termostabil.

    Untuk amplifikasi in vitro, harus ada molekul DNA template. empat jenis tripofosfat deoksinukleosida (nukleotida) yang mengandung basa nitrogen yang sesuai: adenin (A), timin (T), guanin (D), sitosin (C); oligonukleotida biji buatan yang disintesis (primer) yang terdiri dari 18-20 pasangan basa; enzim polymerase DNA termostabil, memiliki suhu optimum 68-72 o C, dan ion magnesium.

    Kekhususan PCR tergantung pada pilihan fragmen DNA. Sesuai dengan itu, oligonukleotida sisi biji disintesis. Spesifitas hibridisasi dan penyelesaian rantai DNA ditentukan oleh prinsip komplementaritas dari pasangan basa nitrogen berikut: adenin-timin, guanin-sitosin.

    Untuk menentukan genom dari kompleks mycobacterium tuberculosis, target amplifikasi yang paling efektif dalam kebanyakan sistem uji adalah fragmen DNA IS6110, yang pada sebagian besar strain mycobacterium tuberculosis memiliki jumlah yang signifikan (10-20) dari pengulangan genom, yang menyediakan, bersama dengan spesifisitas, sensitivitas tinggi dari analisis. Pada saat yang sama, strain Mycobacterium tuberculosis dengan sejumlah kecil pengulangan atau tidak adanya fragmen IS6110 telah dijelaskan.

    Isolasi molekul DNA dari sampel biologis

    Untuk melaksanakan PCR, molekul DNA patogen harus diisolasi dari bahan biologis dalam volume minimum, dengan jumlah minimum DNA non-insipient dan berbagai inhibitor enzim - DNA polimerase.

    Persiapan sampel harus dilakukan dalam kondisi yang mencegah kontaminasi silang dari sampel yang diteliti oleh molekul DNA yang disekresikan. Untuk tujuan ini, Anda perlu melakukan pretreat ruangan dengan sinar ultraviolet, lantai dan permukaan kerja dari meja dan peralatan - solusi yang mengandung klorin. Anda juga perlu menggunakan sarung tangan bersih, tabung sekali pakai, dan tip untuk pipet otomatis.

    Untuk mengisolasi DNA Mycobacterium tuberculosis dari sampel klinis (cairan serebrospinal, bronchial lavage) yang tidak mengandung sejumlah besar leukosit, puing-puing sel atau garam, itu cukup untuk memusatkan sampel pada 3-4 ribu putaran per menit, tambahkan 20-30 μl larutan 2% ke sedimen triton X-100 dan hangat pada 90 o C selama 30 menit.

    Untuk persiapan sampel dahak, pengenceran yang efektif diperlukan, yang biasanya larutan natrium hidroksida 4% dan N-asetil-L-sistein (NALC) dalam jumlah 50-80 mg per sampel digunakan, tergantung pada viskositas sampel. Larutan NALC harus disiapkan ex tempore atau bubuk NALC dapat ditambahkan dalam bentuk kering langsung ke sampel. Setelah pengenceran, sampel harus disentrifugasi selama 15 menit pada 3,5-4 ribu putaran per menit (3000 g) dalam 50 tabung ml dengan tutup ulir, yaitu. dalam kondisi yang sama yang direkomendasikan untuk persiapan sebelum pembukaan sputum.

    Untuk ekstraksi DNA dari sedimen, metode yang didasarkan pada penggunaan 5-6 solusi molar guanidin isothiocyanate sebagai lysing reagent dan partikel silika mikroporous ("diatomaceous earth") molekul DNA sorbing lebih umum digunakan. Zat non-spesifik, termasuk inhibitor yang mungkin, kemudian dicuci dalam larutan 2,5 molar larutan guanidin isotiosianat dan etanol, setelah itu molekul DNA terdesorpsi dalam air, dan sampel ini digunakan untuk PCR. Untuk menyederhanakan teknologi ekstraksi DNA, "tanah diatom" sering diganti dengan mikropartikel magnetik dilapisi dengan silika. Pada saat yang sama, alih-alih sentrifugasi, tabung magnetik khusus untuk tabung mikrotest digunakan untuk mengendapkan partikel.

    Di Rusia, metode asli pemisahan imunomagnetik dari mycobacteria telah dikembangkan, diikuti oleh ekstraksi DNA patogen. Untuk pemisahan imunomagnetik mycobacterium tuberculosis, ferropartikel 3-5 µm digunakan, dilapisi dengan silikon oksida, dimana antibodi poliklonal (kelinci) untuk mycobacteria tuberculosis dilekatkan dengan ikatan kimia. Setelah lisis alkali, sampel sputum dinetralkan dengan larutan asam Tris-HCl dan diinkubasi dengan sorben imunomagnetik. Kemudian partikel-partikel imunopoli dikumpulkan menggunakan tongkat magnet dengan ujung yang dapat diganti, dipindahkan ke mikrovial, diendapkan. 20-30 μl larutan Triton X-100 2% diterapkan dan dipanaskan selama 30 menit pada 90 o C. Supernatan digunakan sebagai kerangka DNA untuk analisis PCR.

    Masalah yang sulit adalah isolasi Mycobacterium tuberculosis DNA dari spesimen biopsi. Untuk lisis biopsi digunakan enzim - proteinase K pada konsentrasi akhir 200-500 mg / l pada suhu 56 o Dengan pada malam hari. Selanjutnya, alokasikan salah satu metode yang dikenal. Kelebihan DNA nonspesifik dalam analisis PCR dari spesimen biopsi sering berfungsi untuk menghambat reaksi, yang membutuhkan ekstraksi berulang DNA.

    Metode Deteksi Hasil

    Setelah menyelesaikan reaksi, fragmen DNA patogen yang diperkuat diidentifikasi menggunakan berbagai metode.

    Metode elektroforesis gel yang terkenal. Pada saat yang sama, fragmen DNA yang diperoleh diidentifikasi oleh kontrol positif, mengandung fragmen DNA spesifik yang diinginkan, atau dengan ukuran yang diketahui sebelumnya (jumlah pasangan nukleotida) dari fragmen, yang ditentukan menggunakan penanda molekuler standar.

    Di hadapan pewarna khusus, ethidium bromide, dimasukkan ke dalam DNA beruntai ganda. Fragmen DNA yang disintesis dideteksi sebagai band yang bersinar di bawah aksi ultraviolet.

    Ukuran fragmen DNA, ditentukan oleh elektroforesis oleh jarak dari awal, harus sesuai dengan penanda berat molekul yang dikenal atau kontrol positif.

    Metode lain untuk menentukan hasil PCR didasarkan pada hibridisasi produk PCR rantai tunggal dengan probe DNA berlabel biotin yang melengkapi mereka, diikuti dengan deteksi oleh reaksi enzimatik, misalnya, dengan mengikat biotin dari konjugat streptavidin-alkalin fosfatase.

    Berdasarkan jenis deteksi ini, penganalisis PCR telah dibuat di mana deteksi hasil PCR dilakukan secara otomatis sebagai hasil pembacaan densitas optik dalam sampel setelah reaksi enzimatik telah terjadi.

    Kerugian dari metode ini terletak pada kemungkinan kontaminasi intralaboratory dengan fragmen molekul DNA yang agak pendek. Molekul-molekul ini, ketika dilepaskan ke sampel yang baru diselidiki, menjadi matriks untuk PCR dan mengarah ke hasil positif palsu.

    Dalam hal ini, untuk mencegah hasil positif palsu, aturan ketat diperkenalkan untuk memisahkan dan mengisolasi tempat: untuk mengisolasi DNA dari sampel-sampel biologis; tempat untuk mendeteksi hasil (elektroforesis) dari zona bersih. Kamar-kamar ini adalah zona kemungkinan kontaminasi. Daerah lain yang terisolasi adalah ruang bersih untuk memperkenalkan sampel uji DNA ke dalam tabung reaksi dengan campuran reaksi untuk PCR. Akhirnya, diasumsikan bahwa perangkat utama - penguat DNA - harus dipindahkan ke ruang terpisah, mungkin kantor.

    Untuk mencegah kontaminasi dengan produk reaksi sebelumnya - dengan ampicons, beberapa sistem uji PCR bukan deoxynucleoside timidin mengandung deoxynucleosiduride, yang dimasukkan ke posisi yang sesuai selama sintesis rantai in vitro, yaitu. timin base nitrogen, yang ada dalam DNA asli, digantikan oleh uracil. Uracil DNA glycosylase, ditambahkan ke campuran reaksi ke bahan yang akan dianalisis, hanya menghancurkan fragmen yang terkontaminasi dengan deoxyuridine, tetapi tidak DNA yang dianalisa. mengandung deoxythymidine. Pemanasan berikutnya pada 94 o C menonaktifkan enzim ini dan tidak mengganggu amplifikasi PCR.

    Ada sistem uji berdasarkan amplifikasi isotermal rRNA, di mana transkripsi dan sintesis molekul DNA terbalik dilakukan lebih dulu. yang, pada gilirannya, adalah template untuk sintesis molekul RNA berikutnya. Amplikon RNA dideteksi menggunakan probe DNA berlilin acridine selama hibridisasi dalam larutan tabung reaksi. Metode ini, selain sensitivitas tinggi, memiliki keuntungan dalam melakukan analisis dalam tabung uji tunggal, yang mencegah kontaminasi. Menurut penulis, sensitivitas metode ini pada sampel pernafasan mencapai 90% dengan spesifisitas 99-100%.

    Metode deteksi baru diimplementasikan dalam PCR waktu nyata. Metode-metode ini terutama dibedakan oleh fakta bahwa PCR dan pendeteksian hasilnya dilakukan secara simultan dalam satu tabung tertutup. Ini tidak hanya secara teknologi menyederhanakan metode analisis, tetapi juga mencegah kontaminasi ruangan laboratorium dan sampel uji dengan produk-produk yang mendahului PCR.

    Dalam PCR real-time, deteksi hasil terjadi karena fluoresensi yang timbul dari hibridisasi probe DNA fluorogenik dengan fragmen DNA spesifik yang diamplifikasi selama PCR. Struktur probe DNA fluorogenik dibangun sedemikian rupa sehingga penanda fluorescent dilepaskan sebagai hasil dari reaksi enzimatik atau menjauhkan dari molekul pemadam fluoresensi hanya selama hibridisasi tertentu dengan molekul DNA yang diinginkan diperkuat selama PCR. Dengan peningkatan jumlah molekul hibridisasi dengan probe, peningkatan fluoresensi ke tingkat terdeteksi sebanding dengan jumlah molekul produk yang diperkuat. Karena jumlah molekul fragmen DNA berlipat ganda selama setiap siklus PCR, nomor siklus dari mana fluoresensi ditentukan dan meningkat berbanding terbalik dengan jumlah molekul DNA dalam sampel asli. Jika beberapa konsentrasi molekul yang diketahui dari fragmen DNA yang sesuai dari Mycobacterium tuberculosis dimasukkan ke dalam reaksi sebagai kalibrator, maka jumlah genom DNA dalam materi yang diteliti dapat dihitung menggunakan program komputer.

    Setiap sampel standar diduplikasi. Kriteria kuantitatif adalah jumlah minimum siklus PCR yang diperlukan untuk memulai dan pertumbuhan fluoresensi yang terdeteksi. Absis adalah jumlah siklus; sumbu ordinat adalah nilai fluoresensi. Konsentrasi DNA berbanding terbalik dengan jumlah siklus yang diperlukan untuk munculnya fluoresensi. Di jendela kolom kanan (21-32) nomor siklus untuk masing-masing konsentrasi ditandai. Perbedaan antara 10 kali lipat konsentrasi fragmen DNA 10 2 -10 6 ml - 3,2-3,4 siklus. Untuk dua pasien, konsentrasi fragmen IS6110 adalah sekitar 10 3 / ml dan 10 4 / ml. Dengan mempertimbangkan jumlah pengulangan (6-20) dari fragmen yang dianalisis dalam genom Mycobacterium tuberculosis, jumlah mycobacteria dalam spesimen klinis adalah sekitar 100 dan 1000 sel, masing-masing.

    Penggunaan PCR dalam diagnosis tuberkulosis

    Metode PCR paling banyak digunakan untuk diagnosis tuberkulosis yang dipercepat - deteksi mycobacterium tuberculosis pada spesimen klinis: sputum. pencucian bronkial, eksudat pleura, urin, cairan serebrospinal, belang-belang osteolisis, aspirasi saluran genital perempuan dan berbagai spesimen biopsi. Dalam sebuah penelitian di Belanda sekitar 500 spesimen sputum dan usapan bronkus dari 340 pasien dengan diagnosis tuberkulosis paru dikonfirmasi, sensitivitas komparatif PCR, budaya dan mikroskopi BTA dipelajari. Sensitivitas analisis adalah 92.6.88.9 dan 52.4%, masing-masing. Dalam hal ini, spesifisitas semua metode adalah sekitar 99%.

    Perbandingan dibuat dari efisiensi pendeteksian mycobacterium tuberculosis dengan metode smear microscopy, pembenihan pada media Lowenstein-Jensen, sistem uji WASTES dan analisis PCR. PCR menunjukkan sensitivitas 74,4%, mikroskopi - 33,8%, pembenihan pada media padat - 48,9% dan kotoran - 55,8%. Waktu deteksi rata-rata untuk disemai pada media Levenshtein-Jensen adalah 24 hari. Limbah - 13 hari, PCR - 1 hari.

    Kemungkinan menggunakan PCR sebagai metode sensitif dan cepat untuk memantau efektivitas pengobatan untuk tuberkulosis juga dibahas.

    Deteksi DNA Mycobacterium tuberculosis oleh PCR dengan kemoterapi efektif ditentukan untuk waktu yang lebih lama - rata-rata 1,7 bulan dibandingkan dengan sekresi bakteri yang terdeteksi oleh mikroskop fluorescent, dan 2,5 bulan dibandingkan dengan pemeriksaan bakteriologis.

    Diagnosis tuberkulosis ekstrapulmoner

    Nilai PCR sebagai metode sensitif sangat bagus untuk bentuk ekstrapulmoner, karena dalam bentuk ini metode x-ray klinis dan metode bakteriologis tradisional untuk menentukan mycobacterium tuberculosis dalam bahan diagnostik tidak efektif.

    Ketika memeriksa sampel urin, hasil analisis PCR positif pada 16 dari 17 pasien dengan tuberkulosis aktif pada sistem urin dan negatif pada 4 pasien dengan tuberkulosis tidak aktif pada ginjal dan 39 pasien dengan penyakit non-tuberkulosis pada sistem kemih.

    Efisiensi analisis PCR ditunjukkan dalam studi aspirasi sumsum tulang pada pasien dengan demam genesis tidak jelas dalam kecurigaan sifat tuberkulosis penyakit. Untuk diagnosis limfadenitis tuberkulosis pada anak-anak, 102 pungsi aspirasi dan spesimen biopsi dari 67 anak dengan limfadenitis tuberkulosis yang diteliti dipelajari. Hasil positif diperoleh: dengan PCR real-time - 71,6%. mikroskopi fluoresensi - 46,3%. studi budaya - 41,8%. Dalam sebuah studi dari 50 biopsi kelenjar getah bening pada pasien dengan penyakit gores kucing, semua hasilnya negatif. Dengan demikian, spesifisitas 100% dari analisis PCR ditunjukkan. Dalam pekerjaan yang sama, dengan tusukan biopsi kelenjar getah bening, kemungkinan mendeteksi M. avium ditunjukkan.

    Diagnosis tuberkulosis genital perempuan dengan infertilitas diketahui sebagai salah satu masalah diagnostik yang paling sulit. Sebuah penelitian menggunakan PCR dari biopsi endometrium, aspirasi endometrium, dan sampel cairan dari ruang Douglas di 14 (56%) dari 25 pasien yang diperiksa secara laparoskopi dengan dugaan tuberkulosis, menunjukkan hasil positif. Menggunakan smear microscopy dan studi budaya, 1 dan 2 diperoleh, masing-masing, hasil positif. Kasus-kasus ini juga PCR positif. Sebagian besar hasil PCR-positif terkait dengan kasus dengan tanda karakteristik tuberkulosis menurut pemeriksaan histologis; jumlah yang lebih kecil - dalam kasus dugaan tuberkulosis menurut laparoskopi. Hanya satu analisis PCR positif yang diperoleh dengan tidak adanya data laparoskopi untuk tuberkulosis.

    Ketika mendiagnosis bentuk tuberkulosis ekstrapulmoner, dokter sering memiliki pertanyaan tentang kemungkinan mendeteksi patogen dalam penelitian PCR dari sampel darah. Data literatur menunjukkan bahwa deteksi DNA Mycobacterium tuberculosis dari sampel darah dimungkinkan dengan bentuk lanjutan dari infeksi HIV. Mycobacterium tuberculosis DNA terdeteksi hanya dalam kasus tuberculosis umum dari berbagai organ pada pasien dengan transplantasi ginjal dan imunosupresi.

    Identifikasi spesies mycobacteria

    Metode PCR dapat sangat efektif untuk identifikasi cepat dari kompleks mycobacterium tuberculosis dan beberapa jenis mikobakteri non-tuberkulosis setelah pertumbuhan awal mereka. Dalam hal ini, penggunaan PCR dapat menghemat 7-10 hari diperlukan untuk identifikasi budaya berikutnya dari hasil yang positif. Penelitian oleh PCR secara teknis sangat sederhana, karena tidak memerlukan persiapan sampel yang kompleks dari bahan klinis untuk mencapai sensitivitas yang tinggi. Dalam studi 80 budaya positif dalam sistem tes semacam itu (MB VasT. Dari perusahaan Organon), semua hasil positif dari analisis PCR sangat spesifik dan dilakukan selama 1 hari. Untuk mengidentifikasi jenis lain dari mycobacteria, ketika mereka diperoleh dalam budaya, DNA patogen hibridisasi dengan probe DNA spesifik berlabel dengan acridine, dan strain terdeteksi oleh kemiluminesensi kemunculan menggunakan chemiluminometer atau pada strip nitrocellulose dengan penilaian visual setelah hibridisasi. Dengan kit ini, sejumlah spesies terbatas diidentifikasi: kompleks Mycobacterium tuberculosis. M. avium, M. avium complex, M. kansasii dan M. gordonae.

    A.Telenti et al. mereka juga mengembangkan metode yang relatif sederhana dan murah untuk identifikasi spesies mycobacteria yang penting secara klinis berdasarkan PCR dan pemrosesan selanjutnya dengan dua enzim restriksi (enzim yang memiliki sifat untuk memotong molekul DNA pada titik-titik tertentu). Ketika ini diperkuat, fragmen DNA. pengkodean protein kejutan panas (65 kDa), setelah itu fragmen DNA dari 439 pasangan nukleotida yang diperoleh dengan PCR diproses secara terpisah oleh dua enzim - Bste II dan Hae III. Kemudian, dengan menggunakan elektroforesis gel agarosa, kedua produk yang diperoleh dianalisis, menentukan ukurannya (jumlah pasangan nukleotida) menggunakan satu set fragmen DNA standar (penanda DNA molekuler) dengan panjang dari 100 hingga 1000 pasangan nukleotida. Dalam setiap spesies tertentu (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. fortuitum), 2 atau 3 fragmen DNA dengan ukuran berbeda ditemukan untuk setiap enzim restriksi. Kombinasi berbagai fragmen DNA berukuran berbeda memungkinkan diferensiasi spesies ini di antara mereka sendiri.

    Teknologi microchip DNA biologis sedang dikembangkan. yang akan membantu mengidentifikasi lebih dari 100 jenis mycobacteria dalam satu penelitian.

    Identifikasi spesies juga dapat dilakukan menggunakan amplifikasi PCR dari wilayah variabel 16S rRNA, diikuti dengan pengurutan amplikon bila dibandingkan dengan struktur primer yang sesuai, yang memungkinkan identifikasi lebih dari 40 spesies mikobakteria.

    Menggunakan PCR, identifikasi spesies juga dapat dilakukan dalam kompleks mycobacterium tuberculosis, termasuk diferensiasi M. bovis dan M. bovis BCG. Untuk ini, ada atau tidak adanya gen tertentu di daerah genom RD1 dianalisis. RD9 dan RD10. RD1 tidak ada dalam M. bovis BCG, tetapi hadir pada spesies virulen, termasuk M. bovis.

    Penentuan kerentanan obat Mycobacterium tuberculosis menggunakan PCR

    Tugas metode genetika molekuler untuk menentukan kerentanan obat atau resistensi Mycobacterium tuberculosis direduksi menjadi identifikasi mutasi pada urutan nukleotida tertentu dari gen yang diketahui. Metode utama didasarkan pada pembacaan langsung (urutan) urutan ini setelah amplifikasi, atau pada hibridisasi fragmen DNA berlabel biotin yang diperkuat selama PCR dengan probe DNA. Kedua varian menyarankan identifikasi substitusi dalam urutan nukleotida yang, ketika menggunakan probe DNA, mengarah pada tidak adanya atau hibridisasi cacat pada membran nitrocellulose menggunakan enzim konjugat (streptavidin-alkaline phosphatase) - metode LIPA-Rif-TB.

    Metode pengukuran fluoresensi dalam probe DNA yang diperbaiki secara lokal pada mikrosit yang melengkapi mutasi yang diketahui di daerah PCR-amplifikasi gen yang bertanggung jawab untuk sensitivitas atau resistensi obat disebut metode microbiochip. Algoritma dasar untuk melakukan penelitian ini adalah sebagai berikut. Setelah mengisolasi DNA dari sampel klinis atau kultur mikobakteria, penting untuk melakukan PCR untuk memperkuat fragmen gen gRV yang bertanggung jawab untuk kepekaan obat terhadap rifampisin, atau gen katG dan inhA yang mengkode protein mikobakteri yang bertanggung jawab untuk sensitivitas isoniazid. Hasil PCR dinilai menggunakan elektroforesis gel agarosa, yang menegaskan persiapan fragmen DNA yang sesuai dengan panjang yang diinginkan. Ini diikuti oleh putaran kedua PCR untuk pengenalan label fluorescent ke dalam DNA. Hasil PCR sekali lagi dikonfirmasi oleh elektroforesis gel. Setelah itu, hibridisasi (inkubasi semalam) dilakukan diikuti dengan mencuci bahan yang diperoleh pada biochip, yang merupakan sejumlah besar rantai DNA pendek (probe) yang dipasang di piring kaca kecil, melengkapi urutan nukleotida Mycobacterium tuberculosis yang peka terhadap obat pada titik-titik kemungkinan mutasi. serta urutan mutan yang bertanggung jawab untuk resistansi obat. Pengaturan probe DNA pada pelat sangat ditentukan, dan tingkat fluoresensi diamati selama hibridisasi untuk menentukan hasil menggunakan pembaca khusus diatur. Dalam hal ini, hasil analisis ditentukan menggunakan program komputer khusus.

    Dalam beberapa tahun terakhir, metode alternatif untuk menentukan kerentanan obat Mycobacterium tuberculosis berdasarkan teknologi PCR real-time telah dikembangkan, memungkinkan penelitian ini dilakukan dalam mode tabung tertutup.

    Dalam ara. 13-13 menyajikan hasil analisis kultur klinis Mycobacterium tuberculosis ketika menentukan resistansi obat terhadap rifampisin menggunakan PCR real-time: 218 - sampel kontrol (sensitif terhadap rifampicin); 93 - kontrol positif untuk mutasi Ser-Trp TCG-TGG; 4482 - kontrol positif untuk mutasi Ser-Leu TCG-TTG; 162-322 - sampel eksperimental. Hasil perhitungan kurva amplifikasi kinetik untuk 4 saluran: saluran 1: 393 - kontrol positif untuk mutasi Ser-Trp TCG-TGG; saluran 2: 4482 - kontrol positif untuk mutasi Ser-Leu TCG-TTG; 162, 163, 172, 295 - sampel percobaan; saluran 4: kurva amplifikasi kinetik dari semua sampel yang terlibat dalam percobaan. Reaksi amplifikasi kontrol positif. Kesimpulan: hasil analisis menunjukkan mutasi berikut yang menentukan resistensi terhadap rifampisin: pada sampel 162.163.172.295 - Ser-Leu TCG-TTG. Prinsip yang sama digunakan untuk menentukan resistensi obat terhadap isoniazid untuk gen katG dan inhA, yang menentukan mutasi yang paling sering.

    Identifikasi regangan mycobacterium tuberculosis

    Metode yang paling dipelajari dari identifikasi strain Mycobacterium tuberculosis adalah teknologi yang disebut polimorfisme fragmen panjang restriksi (RFLP, atau RFLP dalam versi bahasa Inggris) dan yang didasarkan pada fragmen (membatasi) DNA Mycobacterium tuberculosis dengan enzim Pvu II dan hibridisasi selanjutnya dari fragmen yang diperoleh dengan urutan spesifik pada DNA. elemen pengulangannya adalah IS6110. Variabilitas intraspecific diwujudkan karena jumlah yang berbeda dari pengulangan IS6110 dan lokasinya pada DNA. serta keragaman jarak antara titik-titik tertentu dari serangan enzim restrictase (situs pembatasan) dan elemen IS6110. Teknologi ini sangat kompleks dan memakan waktu. Setelah memproses DNA yang diisolasi dari kultur Mycobacterium tuberculosis dengan enzim restriksi, elektroforesis gel dilakukan, kemudian fragmen DNA dengan berbagai panjang ditransfer ke membran nitroselulosa, dihibridisasi dengan fragmen IS6110, dan hasilnya dideteksi menggunakan reaksi enzimatik. Pola spesifik yang dihasilkan dari band-band ciri DNA dari strain tertentu Mycobacterium tuberculosis. Menggunakan analisis komputer mengungkapkan identitas atau afinitas strain. Meskipun metode RFLP adalah yang paling diskriminatif, yaitu mengungkapkan sejumlah besar perbedaan dalam strain yang dianalisis, tidak efektif dengan sejumlah kecil (kurang dari 5) dari pengulangan IS6110 yang diamati pada beberapa strain. Dalam ara. 13-14 menyajikan hasil RFLP mengetik strain.

    Sebuah alternatif mungkin adalah metode spoligotyping (spoligotyping) —sebuah analisis polimorfisme sekuens DNA spacer — antara pengulangan langsung dari wilayah DR. Ketika melakukan spoligotyping strain, PCR dilakukan dengan primer yang membatasi wilayah DR, setelah itu fragmen dari berbagai panjang terbentuk, yang berhibridisasi dengan daerah perantara DNA yang bervariasi. Analisis sekuens spacer dari wilayah DR disajikan. menurut peneliti, itu lebih sederhana, lebih produktif dan cocok untuk skrining utama strain dan analisis epidemiologi awal, serta studi tentang bahan klinis langsung.

    Jelas, metode yang lebih efisien dan dapat diakses secara teknologi adalah VNTR (singkatan dari kata-kata bahasa Inggris), atau metode untuk menentukan jumlah variabel pengulangan tandem yang tepat dalam DNA Mycobacterium tuberculosis. Metode ini hanya didasarkan pada penggunaan PCR dan tidak memerlukan manipulasi tambahan. Karena jumlah pengulangan tandem dalam strain yang berbeda dan lokus yang berbeda berbeda, fragmen dari berbagai ukuran ditentukan dan dianalisis pada hasil elektroforegram produk PCR. Menurut para peneliti, tingkat diskriminasi yang lebih besar dari strain dicapai dengan bantuan VNTR dibandingkan dengan metode RFLP.

    Dalam beberapa tahun terakhir, banyak perhatian telah diberikan kepada penyebaran strain Mycobacterium tuberculosis dari keluarga W-Beijing (kadang-kadang mereka disebut strain Beijing), yang sebagian besar resistan terhadap obat.

    Persyaratan dasar untuk kualitas studi biologi molekuler

    Dokumen peraturan dasar untuk PCR

    Pesanan dari Departemen Kesehatan Rusia: No. 45 tanggal 7 Februari 2000. No. 109 tanggal 21 Maret 2003. No. 64 tanggal 21 Februari 2000. Pedoman standar: 1.3.1888-04 “Organisasi kerja selama penelitian PCR materi yang terinfeksi dengan patogenik biologis agen kelompok patogenisitas III-IV "; 1.3.1794-03 "Organisasi kerja selama PCR mempelajari materi yang terinfeksi mikroorganisme dari kelompok patogenisitas I-II". 2003; 3.5.5.1034-01 "Disinfeksi bahan uji yang terinfeksi bakteri kelompok I-IV pathogenicity saat menggunakan metode PCR", 2001. Lampiran 11 pada Instruksi tentang metode terpadu penelitian mikrobiologi dalam deteksi, diagnosis dan pengobatan tuberkulosis

    Staf

    Dokter diagnosa laboratorium klinis, ahli bakteriologi, virologi, ahli biologi dari laboratorium diagnostik klinis, serta spesialis dengan pendidikan kedokteran sekunder yang telah lulus spesialisasi dan pelatihan lanjutan dengan cara yang ditentukan dapat melakukan studi biologi molekuler.

    Laboratorium tempat perangkat

    Fasilitas laboratorium berikut diperlukan:

    • Area pengolahan sampel adalah laboratorium yang disesuaikan untuk bekerja dengan agen infeksi kelompok III-IV patogenisitas, sesuai dengan pedoman Metodologis 13.1888-04.
    • Zona untuk persiapan campuran reaksi PCR - ruang laboratorium, yang memberikan perlindungan terhadap kontaminasi laboratorium internal - zona "bersih".
    • • Jika elektroforesis atau hibridisasi digunakan untuk menganalisis produk PCR. ruang laboratorium tempat fragmen DNA yang diperbanyak diekstrak dari tabung amplifikasi dan, karenanya, dapat dilepaskan ke lingkungan, sesuai dengan persyaratan untuk laboratorium PCR (Pedoman 1.3.1794-03, Pedoman 1.3.1888-04) harus benar-benar diisolasi dari tempat yang ditunjukkan pada paragraf sebelumnya. Pergerakan dari zona elektroforesis ke zona pemrosesan sampel dan zona "bersih" dari setiap personel, peralatan, material dan benda apa pun, serta transfer udara melalui sistem ventilasi atau sebagai akibat dari draft harus dikecualikan. Zona ini tidak diperlukan untuk deteksi fluorimetrik produk PCR.
    • Ruang untuk dokumentasi dan pengolahan hasil dilengkapi dengan komputer dan peralatan kantor yang diperlukan. Peralatan dapat ditemukan di ruangan ini untuk mendeteksi produk PCR tanpa membuka tabung. - Detektor PCR fluorescent dan thermocyclers untuk PCR real-time.

    Persyaratan sanitasi dan epidemiologi untuk pengobatan utama dahak mirip dengan persyaratan mikrobiologi standar untuk bekerja dengan mycobacteria tuberkulosis.

    Set lengkap peralatan laboratorium untuk diagnostik PCR

    Paket laboratorium termasuk peralatan untuk ruangan-ruangan berikut.

    • Ruang persiapan sampel berisi peralatan berikut: kelas perlindungan laminar II "SP-1.2": termostat solid-state dengan tutup berpemanas untuk tabung jenis Eppendorf; microcentrifuge pada 13.000 rpm; centrifuge ("Vortex"); lemari es dengan kisaran suhu dari -20 ° C hingga +10 ° C; pipet volume variabel dari seri Proline; pompa dengan perangkap labu OM-1; pipet berdiri; tripod tempat kerja 200x0,5 ml; tripod tempat kerja 50x1,5 ml; rak untuk tabung penyimpanan 80x1,5 ml;
    • ruang untuk persiapan campuran reaksi: ruang pelindung PCR-kotak ("Laminar-C. 110 cm); centrifuge - "Vortex"; pipet volume variabel dari seri Profesional; pipet berdiri; tripod tempat kerja 200x0,2 ml; rak untuk tabung penyimpanan 80x1,5 ml; lemari es dengan kisaran suhu -20 o C hingga + 10 o C;
    • ruang elektroforesis: ruang untuk elektroforesis horizontal; catu daya; transilluminator;
    • Amplificator DNA atau penganalisis asam nukleat (real-time PCR) dengan komputer dan perangkat lunak; dapat ditempatkan di ruang bebas apa pun. Jika menggunakan teknologi PCR secara real time. ruang elektroforesis tidak diperlukan.

    Kontrol kualitas eksternal

    Untuk keyakinan dalam memperoleh hasil yang dapat dipercaya secara obyektif, laboratorium harus berpartisipasi dalam sistem penilaian kualitas eksternal penelitian laboratorium.

    Peserta dalam sistem kontrol kualitas menerima; 12 ampul dengan suspensi lyophilized sel bakteri, dua di antaranya mengandung E. coli E. coli, 3 ampul dengan mycobacterium tuberculosis (avirulent strain) pada konsentrasi 10 2 / ml; 3 ampul dengan sel-sel strain yang sama pada konsentrasi 10 4 / ml; 2 ampul dengan mycobacteria M. avium-intracellulare dan M. kansasii tanpa konsentrasi pada konsentrasi 10 5 / ml.

    Tes terdistribusi untuk penilaian kualitas eksternal telah diuji sebelumnya di dua laboratorium independen dengan pengalaman yang luas di bidang ini.